魚(yú)類(lèi)脂味覺(jué)的行為學(xué)檢測(cè)及候選脂味受體CD36的克隆與表達(dá).pdf

1、味覺(jué)是動(dòng)物對(duì)目標(biāo)食物采取接受或拒絕行為而進(jìn)行化學(xué)感受的最后一步,對(duì)于動(dòng)物攝取食物的安全及動(dòng)物合理的營(yíng)養(yǎng)需要十分重要。傳統(tǒng)上認(rèn)為,哺乳動(dòng)物具有5種基本味覺(jué),即:酸、甜、苦、咸和鮮(umami)。研究表明,人們之所以能夠感受酸、甜、苦、咸、鮮味,是因?yàn)樵谖独僦写嬖谥@五種味覺(jué)受體(tastereceptor,TR)。近年來(lái)對(duì)嚙齒動(dòng)物和人類(lèi)的研究表明可能還存在第六種味覺(jué),即對(duì)脂肪酸等脂肪類(lèi)食物的味覺(jué)感受(脂味覺(jué))。研究顯示,斑馬魚(yú)具有苦味和氨

2、基酸味的感受,但魚(yú)類(lèi)是否具有脂味感受呢?到目前為止,這還是一個(gè)謎。基于此,本論文擬通過(guò)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)魚(yú)類(lèi)是否具有對(duì)脂肪酸的味覺(jué)感受,如果存在,我們擬進(jìn)一步嘗試對(duì)魚(yú)類(lèi)候選脂味受體進(jìn)行鑒定。
　　 由于魚(yú)類(lèi)生活在水中,給有關(guān)魚(yú)類(lèi)味覺(jué)行為學(xué)的實(shí)驗(yàn)帶來(lái)不小的難度。我們選取斑馬魚(yú)和藍(lán)鯊為代表,進(jìn)行了一系列的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)探索魚(yú)類(lèi)的味覺(jué)。對(duì)于斑馬魚(yú),我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑

3、的餌料,并用熒光染料DiIC12(3)對(duì)它們進(jìn)行了熒光標(biāo)記,然后分別飼喂斑馬魚(yú),通過(guò)錄像觀察它們對(duì)不同食物的吞吐情況,食后迅速解剖腸道在熒光顯微鏡下觀察腸道中食物的熒光強(qiáng)度,分析魚(yú)類(lèi)對(duì)不同食物的偏愛(ài)性。結(jié)果表明:在斑馬魚(yú)攝食的初級(jí)階段,觀察到喂養(yǎng)含苦味劑餌料的斑馬魚(yú)有明顯的吞食后再吐出現(xiàn)象,而喂養(yǎng)亞麻酸和亞油酸或氨基酸餌料的斑馬魚(yú)吞食餌料后都沒(méi)有再吐出現(xiàn)象；我們進(jìn)一步觀察斑馬魚(yú)腸道中食物的熒光強(qiáng)度,發(fā)現(xiàn)斑馬魚(yú)對(duì)不同餌料的喜好性為:脂肪酸

4、>氨基酸>苦味劑。綜合之,可以認(rèn)為斑馬魚(yú)對(duì)含脂肪酸和氨基酸的食物具有偏好性,似乎還更偏好含脂肪酸的餌料,而對(duì)含苦味劑denatonium benzoate的餌料有明顯的厭惡感。類(lèi)似地,對(duì)于藍(lán)鯊,我們分別制做了含亞麻酸和亞油酸、糖、氨基酸和苦味劑denatonium benzoat等不同促味劑的餌料,然后分別飼喂藍(lán)鯊,觀察它們對(duì)不同食物的吞吐情況,觀察養(yǎng)殖容器中剩余的餌料的多少,計(jì)算吃掉餌料占飼喂餌料的百分比,分析它對(duì)不同食物的偏愛(ài)性。藍(lán)

5、鯊的味覺(jué)行為學(xué)試驗(yàn)表明:藍(lán)鯊對(duì)含甜味劑糖精的餌料非常喜歡,有明顯的偏愛(ài),對(duì)含脂肪酸和氨基酸的餌料次之,有一定的偏愛(ài),但對(duì)含苦味劑denatonium benzoat的餌料不喜歡,甚至厭惡。魚(yú)類(lèi)中的這些行為學(xué)實(shí)驗(yàn)證明:魚(yú)類(lèi)除了具有苦味和氨基酸味的感受外,還具有脂肪酸的味覺(jué)感受。另外,我們的實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)藍(lán)鯊對(duì)甜味具有偏好性,說(shuō)明魚(yú)類(lèi)可能具有甜味的味覺(jué)感受,這與斑馬魚(yú)無(wú)甜味覺(jué)感受能力的報(bào)道不一致。
　　 CD36是一種在大鼠和小鼠舌上皮

6、細(xì)胞的味蕾中均有表達(dá)的脂類(lèi)黏合蛋白,最近的研究中被確定為感受脂肪酸的受體,尤其是用于識(shí)別長(zhǎng)鏈脂肪酸。我們通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),斑馬魚(yú)中也存在CD36同源基因。通過(guò)RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR分別確定了CD36在不同成魚(yú)組織和不同胚胎發(fā)育時(shí)期中的表達(dá)。研究表明:CD36在不同成魚(yú)組織中的中的表達(dá)如下:在腸中的表達(dá)量最高,在肝、鰓、脾中表達(dá)量次之,而在脊椎、腎、腦、鰾中表達(dá)量相對(duì)較低。CD36在胚胎發(fā)育早期表達(dá)較高,在囊胚期的表達(dá)量達(dá)