CD36在高脂誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織代謝性炎癥中的作用.pdf

1、目的：肥胖、血脂異常、脂肪肝等代謝性疾病已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人類健康的常見病及多發(fā)病，但其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為由營養(yǎng)物和代謝產(chǎn)物所觸發(fā)的低豐度的代謝性炎癥反應(yīng)是代謝性疾病發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)酶/CD36（fattyacidtranslocase/CD36，F(xiàn)AT/CD36）屬于B類清道夫受體家族，不僅可以介導(dǎo)長鏈脂肪酸的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，還可識(shí)別眾多致炎性的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，與代謝性炎癥的發(fā)生密切相關(guān)。本課題選用C57BL/6J小

2、鼠、野生型（widetype，WT）/CD36基因敲除（CD36knockout，CD36KO）小鼠及3T3-L1脂肪細(xì)胞，研究高脂飲食對(duì)脂肪組織CD36的表達(dá)和炎癥反應(yīng)的影響，并進(jìn)一步探討CD36在脂肪組織代謝性炎癥中的作用。
　　方法：將8周齡雄性C57BL/6J小鼠分別隨機(jī)分為普通飲食組（normalchewdiet，NCD）和高脂飲食組（highfatdiet，HFD），喂養(yǎng)14周后，酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-link

3、edimmunosorbentassay，ELISA)測定小鼠血清游離脂肪酸（freefattyacid，F(xiàn)FA）含量；應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量（Real-TimePCR，RT-PCR）和westernblot檢測脂肪組織中CD36及炎癥因子白細(xì)胞介素1（Interleukin-1，IL-1β）、白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）趨化因子單核細(xì)胞趨化蛋白

4、-1(Monocytechemotacticprotein-1,MCP-1),巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1(Macrophageinflammatoryprotein-1,MIP-1)mRNA和蛋白表達(dá)；免疫組織化學(xué)染色檢測脂肪組織CD36、巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記物F4/80蛋白表達(dá)；進(jìn)一步，選用8周齡雄性WT和CD36KO小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)14周，用上述方法檢測WT和CD36KO小鼠的脂肪組織炎癥反應(yīng)。3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化為脂肪

5、細(xì)胞后分為：對(duì)照組（Control,CTL）、不同濃度棕櫚酸處理組（Palmiticacid,PA）處理時(shí)間為24小時(shí)。采用油紅O染色觀察3T3-L1成纖維細(xì)胞脂滴形成情況；RT-PCR和WesternBlotting檢測3T3-L1脂肪細(xì)胞CD36、炎癥因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)、趨化因子（MCP-1,MIP-1）、C-Jun氨基末端激酶（JunN-terminalkinase,JNK）、磷酸化C-Jun氨基末端激酶(P

6、hosphorylationJunN-terminalkinase，P-JNK)蛋白表達(dá)，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測脂肪細(xì)胞NFκB活性；提取脂筏并用westernblot檢測小窩蛋白1(caveolin-1)、CD36含量；免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，CO-IP)檢測脂肪細(xì)胞CD36/TLR4共聚體的形成。
　　結(jié)果：與普通飲食組相比，高脂飲食能使C57BL/6J小鼠血清FFA明顯增加，使脂肪組織內(nèi)CD

7、36mRNA約升高了3.23±0.64倍（P<0.05），CD36蛋白表達(dá)約升高了0.49±0.10倍（P<0.05）；炎癥因子IL-1、TNF-α、IL-6mRNA分別約升高了0.78±0.46倍、1.69±0.65倍、0.94±0.52倍（P<0.05）；趨化因子MCP-1和MIP-1mRNA分別約升高0.89±0.20倍、1.94±0.38倍（P<0.05）；相應(yīng)炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-6，趨化因子MCP-1、MIP-

8、1的蛋白表達(dá)也呈明顯升高趨勢（P<0.05），同時(shí)巨噬細(xì)胞浸潤顯著增加。與高脂飲食喂養(yǎng)的WT小鼠相比，CD36KO小鼠的脂肪組織炎癥因子IL-1、TNF-α、IL-6的mRNA含量分別為WT小鼠的0.56±0.12、0.35±0.097、0.27±0.051（P<0.05）；趨化因子MCP-1和MIP-1的mRNA表達(dá)為WT小鼠的0.59±0.15和0.43±0.12（P<0.05）；同時(shí)CD36KO小鼠脂肪組織炎癥/趨化因子TNF-α

9、、IL-1、IL-6、MCP-1、MIP-1的蛋白表達(dá)也明顯降低（P<0.05），巨噬細(xì)胞浸潤顯著減少。進(jìn)一步在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，RT-PCR及WesternBlotting檢測發(fā)現(xiàn)棕櫚酸能使脂肪細(xì)胞CD36、炎癥因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）、趨化因子（MCP-1、MIP-1）基因蛋白表達(dá)量升高（P<0.05）。提取3T3-L1脂肪細(xì)胞脂筏發(fā)現(xiàn)，PA處理組的定位脂筏部分CD36蛋白占總表達(dá)量的比例增加（P<0.05）。免疫共沉