p53和c-myc在細(xì)胞周期調(diào)控及苯并（a）芘致癌過(guò)程中作用機(jī)理的研究.pdf

1、苯并芘(benzo(a)pyrene，BaP)是環(huán)境中存在的一種化學(xué)致癌物，在體內(nèi)能誘導(dǎo)基因突變或影響細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期的有序性和精確性受到破壞，造成細(xì)胞周期紊亂，甚至惡性轉(zhuǎn)化，最終發(fā)生癌變。人胚肺成纖維細(xì)胞(human embryonic lung fibroblast，HELF)和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549是p53正常表達(dá)細(xì)胞系，人肺腺癌細(xì)胞系H1299屬于p53缺失型細(xì)胞系。本研究首先用BaP染毒HELF、A54

2、9和H1299細(xì)胞，結(jié)果表明BaP可以促進(jìn)HELF和A549細(xì)胞生長(zhǎng)速度加快，體積增大，同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期和G2/M期的轉(zhuǎn)換，但BaP對(duì)H1299細(xì)胞沒(méi)有影響。因此說(shuō)明BaP能顯著促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，并且具有p53表達(dá)依賴性。其次，對(duì)BaP作用后細(xì)胞內(nèi)p53及下游基因和蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明BaP顯著上調(diào)HELF和A549細(xì)胞內(nèi)p53 mRNA和蛋白的表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)p53下游基因cyclin D1、CDK2、CDK4和

3、p21 mRNA和蛋白的表達(dá)，降低cyclin E的表達(dá)。因此說(shuō)明BaP作用細(xì)胞后cyclin D1、CDK2和CDK4的表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而影響細(xì)胞周期的有序進(jìn)行。 抑癌基因p53在BaP影響細(xì)胞周期調(diào)控的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。p53作為轉(zhuǎn)錄因子，可誘導(dǎo)下游相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到調(diào)控細(xì)胞周期的作用。本研究利用野生型和突變型p53質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，結(jié)果表明野生型p53可以延緩細(xì)胞生長(zhǎng)，減小細(xì)胞體積，使細(xì)胞周期阻滯于G1期。野

4、生型p53對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控是通過(guò)降低cyclin A、cyclin E、CDK2和CDK4的表達(dá)，同時(shí)增加p21的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而突變型p53上調(diào)CDK2的表達(dá)引起細(xì)胞周期紊亂。轉(zhuǎn)染野生型p53的A549細(xì)胞染毒BaP后，細(xì)胞生長(zhǎng)加快，體積增大，促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期和G2/M期的轉(zhuǎn)換，同時(shí)上調(diào)cyclinD1、CDK2、CDK4和p21的表達(dá)，并且下調(diào)cyclin A和cyclin E的表達(dá)。結(jié)果表明細(xì)胞在BaP損傷后會(huì)誘導(dǎo)p53的表

5、達(dá)，使細(xì)胞周期阻滯于G1期進(jìn)行損傷修復(fù)，但p53無(wú)法拮抗化學(xué)致癌物高濃度長(zhǎng)時(shí)間的刺激，BaP作用細(xì)胞后cyclin D1、CDK2和CDK4的表達(dá)上調(diào)，從而干擾p53對(duì)細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控。 原癌基因c-myc在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用，在周期紊亂細(xì)胞和大量癌細(xì)胞中都可以檢測(cè)到c-myc的過(guò)表達(dá)。本研究用c-myc真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3c-myc轉(zhuǎn)染c-myc低表達(dá)的HELF細(xì)胞，結(jié)果S期細(xì)胞增多，G2/M期細(xì)胞減少，cycl

6、in D3、cyclinE、cyclinA、CDK2和CDK4表達(dá)增多，p21和p27表達(dá)減少。同時(shí)我們利用RNAi技術(shù)，將c-myc RNA干擾質(zhì)粒pSilencer-c-myc轉(zhuǎn)染入c-myc高表達(dá)的A549內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，cyclin D3、cyclin E、cyclin A、CDK2和CDK4的表達(dá)減少，而p21和p27表達(dá)增多。因此上調(diào)c-myc表達(dá)促進(jìn)HELF細(xì)胞周期進(jìn)程而下調(diào)其表達(dá)阻滯A549細(xì)胞于