p53和c-myc在細胞周期調(diào)控及苯并（a）芘致癌過程中作用機理的研究.pdf

1、苯并芘(benzo(a)pyrene，BaP)是環(huán)境中存在的一種化學(xué)致癌物，在體內(nèi)能誘導(dǎo)基因突變或影響細胞周期調(diào)控相關(guān)基因的表達，導(dǎo)致細胞周期的有序性和精確性受到破壞，造成細胞周期紊亂，甚至惡性轉(zhuǎn)化，最終發(fā)生癌變。人胚肺成纖維細胞(human embryonic lung fibroblast，HELF)和人肺腺癌細胞系A(chǔ)549是p53正常表達細胞系，人肺腺癌細胞系H1299屬于p53缺失型細胞系。本研究首先用BaP染毒HELF、A54

2、9和H1299細胞，結(jié)果表明BaP可以促進HELF和A549細胞生長速度加快，體積增大，同時促進細胞由G1期向S期和G2/M期的轉(zhuǎn)換，但BaP對H1299細胞沒有影響。因此說明BaP能顯著促進細胞的生長和增殖，并且具有p53表達依賴性。其次，對BaP作用后細胞內(nèi)p53及下游基因和蛋白的表達進行了檢測，結(jié)果表明BaP顯著上調(diào)HELF和A549細胞內(nèi)p53 mRNA和蛋白的表達，同時促進p53下游基因cyclin D1、CDK2、CDK4和

3、p21 mRNA和蛋白的表達，降低cyclin E的表達。因此說明BaP作用細胞后cyclin D1、CDK2和CDK4的表達上調(diào)，進而影響細胞周期的有序進行。 抑癌基因p53在BaP影響細胞周期調(diào)控的過程中發(fā)揮重要作用。p53作為轉(zhuǎn)錄因子，可誘導(dǎo)下游相關(guān)蛋白的表達，從而達到調(diào)控細胞周期的作用。本研究利用野生型和突變型p53質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染A549細胞，結(jié)果表明野生型p53可以延緩細胞生長，減小細胞體積，使細胞周期阻滯于G1期。野

4、生型p53對細胞周期的調(diào)控是通過降低cyclin A、cyclin E、CDK2和CDK4的表達，同時增加p21的表達來實現(xiàn)的，而突變型p53上調(diào)CDK2的表達引起細胞周期紊亂。轉(zhuǎn)染野生型p53的A549細胞染毒BaP后，細胞生長加快，體積增大，促進細胞由G1期向S期和G2/M期的轉(zhuǎn)換，同時上調(diào)cyclinD1、CDK2、CDK4和p21的表達，并且下調(diào)cyclin A和cyclin E的表達。結(jié)果表明細胞在BaP損傷后會誘導(dǎo)p53的表

5、達，使細胞周期阻滯于G1期進行損傷修復(fù)，但p53無法拮抗化學(xué)致癌物高濃度長時間的刺激，BaP作用細胞后cyclin D1、CDK2和CDK4的表達上調(diào)，從而干擾p53對細胞周期的負調(diào)控。 原癌基因c-myc在細胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用，在周期紊亂細胞和大量癌細胞中都可以檢測到c-myc的過表達。本研究用c-myc真核表達質(zhì)粒pcDNA3c-myc轉(zhuǎn)染c-myc低表達的HELF細胞，結(jié)果S期細胞增多，G2/M期細胞減少，cycl

6、in D3、cyclinE、cyclinA、CDK2和CDK4表達增多，p21和p27表達減少。同時我們利用RNAi技術(shù)，將c-myc RNA干擾質(zhì)粒pSilencer-c-myc轉(zhuǎn)染入c-myc高表達的A549內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其G1期細胞增多，S期細胞減少，cyclin D3、cyclin E、cyclin A、CDK2和CDK4的表達減少，而p21和p27表達增多。因此上調(diào)c-myc表達促進HELF細胞周期進程而下調(diào)其表達阻滯A549細胞于