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文檔簡介
1、目的:采用免疫組織化學技術及神經行為學的方法研究不同錳濃度對小鼠側腦室神經發(fā)生及其功能的影響,從另一方面探討錳中毒的腦損害及其機制,為職業(yè)性錳中毒的基礎研究及干預治療提供實驗依據。
方法:1、動物及分組:選用清潔級(SPF)健康的成年雄性昆明小鼠48只,體重在18-22 g之間(由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供,動物許可編號:SCXK桂2010-0002)。適應性飼養(yǎng)小鼠1周,讓其適應環(huán)境。將選好的小鼠按體重隨機方法分為4組,即
2、對照組(CG)、低劑量錳中毒組(LDG)、中劑量錳中毒組(MDG)、高劑量錳中毒組(HDG),每組12只,做好各組小鼠的編號標記,稱量體重。2、造模前神經行為學檢測:對四組小鼠分別行曠場試驗、懸掛試驗、轉輪試驗,做好各組的數據記錄。3、制作錳中毒小鼠模型:分別對低劑量錳中毒組(LDG)、中劑量錳中毒組(MDG)、高劑量錳中毒組(HDG)小鼠予腹腔注射不同劑量的氯化錳(MnCl2·4H2O)溶液,劑量分別為3.75mg/kg、7.5 mg
3、/kg、15 mg/kg,溶劑為生理鹽水(0.9%NaCl溶液,滅菌)。其余對照組(CG)小鼠予腹腔注射等體積的生理鹽水(0.9%NaCl溶液,滅菌)。每日定時腹腔注射1次,連續(xù)染錳4周(7d/周,共28d)。造模結束后,所有的動物均按實驗進展處理。各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng),12h晝12h夜,自由攝食、飲水。4、造模后神經行為學檢測:造模結束后3d,分別對各組小鼠行曠場試驗、懸掛試驗和轉輪試驗。5、免疫組織化學染色:用免疫組化技術檢測四
4、組小鼠的室管膜下區(qū)(SVZ區(qū))GFAP、DCX的陽性表達,計數所得免疫組織化學染色圖像的對應陽性細胞數,做好記錄。統(tǒng)計學方法:行為學數據用均數和標準誤(±S)表示,免疫組化染色的數據用均數和標準差(±S)表示。用統(tǒng)計軟件Spss16.0分析各組小鼠曠場試驗、懸掛試驗、轉輪試驗、免疫組化染色實驗所得的數據。多個均數比較用單因素方差分析(One-Way NAOVA),據方差齊性與否,兩兩比較選擇LSD或Games-Howell檢驗,以雙側α
5、=0.05作為顯著性檢驗水準。用GraphPad Prism5圖像軟件制作相關條形圖和折線圖等。
結果:1、行為學實驗結果:(1)曠場試驗:造模前,各組小鼠運動的總路程之間均無明顯差異,無統(tǒng)計學意義(P>0.05),適合造模條件。與CG組相比,造模后第1d、第2d、第3d,LDG的總運動路程均無明顯縮短,差異無統(tǒng)計學意義,而MDG和HDG兩組小鼠的總運動路程均明顯縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),MDG和HDG兩組小鼠的
6、總運動路程較LDG組有所縮短,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),MDG和HDG兩組之間無明顯差異。(2)懸掛實驗:造模前,四組小鼠懸繩上的懸掛時間均無明顯差異。與CG組比較,第1d,LDG、MDG和HDG三組小鼠的懸掛時間無明顯縮短,無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且LDG、MDG、HDG三組小鼠之間亦無明顯差異;而第2d和第3d,LDG、MDG和HDG三組小鼠的懸掛時間均顯著縮短,有統(tǒng)計學意義(P<0.001);MDG、HDG兩組小鼠
7、較LDG明顯縮短,有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而HDG組小鼠較MDG組無明顯縮短,差異不明顯。(3)轉輪試驗:造模前,四組小鼠轉輪上停留時間和轉輪上滾動距離均無明顯差異。停留時間:與CG相比,第1d、第2d和第3d,LDG、MDG、HDG三組小鼠在轉輪上停留的時間均明顯縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);且MDH、HDG兩組小鼠停留的時間較LDG明顯縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而MDG和HDG兩組小鼠之間停留的時間無明
8、顯差異。轉動距離:第1d,與CG相比,LDG、MDG和HDG三組小鼠在轉輪上轉動距離無明顯縮短,且LDG、MDG和HDG三組之間亦無明顯差異
(P>0.05);第2d和第3d,與CG比較,LDG組小鼠轉輪上轉動距離無明顯縮短,而MDG、HDG兩組在轉輪上轉動的距離明顯縮短,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與LDG比較,MDG和HDG兩組在轉輪上轉動距離有所縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而MDG、HDG兩組之間的差異不具
9、統(tǒng)計學意義。
2、免疫組化染色結果:(1)GFAP免疫組化結果:與CG比較,LDG組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數量無明顯增多,而MDG和HDG兩組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數量均明顯增多,有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.001);與LDG相比,MDG和HDG兩組在SVZ區(qū)的GFAP陽性細胞數量均明顯增多,差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.001),而HDG較MDG組的SVZ區(qū)GFAP陽性細胞數無明顯增多,不具統(tǒng)計學意義。
10、 ?。?)DCX免疫組化結果:與CG比較,LMG組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數量無明顯減少,而MDG、HDG兩組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數均明顯減少,有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.001);與LDG組相比,MDG、HDG兩組在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數量均明顯減少,有顯著的統(tǒng)計學差異(P<0.001),而MDG、HDG兩組之間在SVZ區(qū)的DCX陽性細胞數量無明顯差異。
結論:1.錳中毒可以損害小鼠的錐體外系的功能,導致運動能力
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