腦缺血對新生大鼠室管膜下區(qū)細(xì)胞凋亡、增殖及分化的影響.pdf

1、目的：探討新生大鼠腦缺血后腦白質(zhì)損傷模型的建立方法，了解腦白質(zhì)損傷的相關(guān)病理過程和形態(tài)學(xué)變化，且利用該模型對SVZ細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)研究，了解缺血對該區(qū)干細(xì)胞的影響，特別是在細(xì)胞凋亡、增殖和分化方面，以探討該區(qū)腦缺血后內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制，為臨床治療提供相應(yīng)的理論依據(jù)。 方法：實驗共分四部分，第一部分采用雙側(cè)頸動脈結(jié)扎的方法造成建立以腦白質(zhì)損傷為主的P3SD大鼠HI模型，術(shù)后進(jìn)行腦重、體重以及側(cè)腦室面積，胼胝體厚度測定，以及紋狀體髓鞘，胼胝

2、體快蘭陽性纖維計數(shù)。第二部分采用連續(xù)切片TUNNEL標(biāo)記，Leica顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)方法檢測SVZd1及SVZa細(xì)胞凋亡情況，TUNNEL/nestin標(biāo)記，圖像疊加技術(shù)檢測凋亡細(xì)胞是否存在神經(jīng)干細(xì)胞。第三部分采用BrdU標(biāo)記，Leica顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)的方法檢測SVZd1和SVZa細(xì)胞的增殖情況，BrdU/nestin雙標(biāo)記檢測神經(jīng)干細(xì)胞的增殖狀況，第四部分采用BrdU/TuJl、BrdU/04、BrdU/GFAP雙標(biāo)記方法分

3、別檢測增殖神經(jīng)干細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化及分布，所有數(shù)據(jù)均采用STAT4.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果：實驗組大鼠術(shù)后腦重、體重即出現(xiàn)增長減慢，術(shù)后1、2、3、7天較對照組明顯；從術(shù)后第7天開始，試驗組P3大鼠側(cè)腦室較對照組明顯擴(kuò)大，同時出現(xiàn)胼胝體亦較對照組明顯變薄，隨后，側(cè)腦室面積及胼胝體厚度與對照相比，差異越來越大。實驗組在術(shù)后1、2周紋狀體髓鞘數(shù)量較對照明顯減少。在術(shù)后1周，實驗組胼胝體陽性纖維明顯較對照組減

4、少。SVZd1凋亡細(xì)胞計數(shù)試驗組在BACO第2天凋亡細(xì)胞明顯增多，第3天達(dá)高峰，對照組細(xì)胞凋亡在術(shù)后前3天也呈增高趨勢。SVZa凋亡細(xì)胞計數(shù)實驗組術(shù)后第2天凋亡細(xì)胞開始增加，到第3天達(dá)到高峰。BACO后第2、3、7天實驗組凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯高于實驗組。連續(xù)組織切片在TUNNEL及nestin標(biāo)記后，Photoshop軟件，將兩圖片重疊，在SVZd1，SVZa未發(fā)現(xiàn)存在雙標(biāo)陽性細(xì)胞。SVZaBrdU細(xì)胞計數(shù)，實驗組增殖細(xì)胞在術(shù)后1-7天維持

5、較高水平，在術(shù)后1、7天有兩個峰值，隨后在術(shù)后10天增殖細(xì)胞開始減少，但仍較對照為高。SVZd1區(qū)在術(shù)后4、7、10、14天細(xì)胞增殖與對照組相比顯著增高，在術(shù)后4-7達(dá)高峰，隨后在術(shù)后10天增殖細(xì)胞開始減少，但仍較對照為高。實驗組和對照組BrdU+/TuJl+(即新生神經(jīng)元)主要集中分布在嗅球，其數(shù)量明顯高于紋狀體和皮質(zhì)。實驗組不同部位BrdU+/TuJl+(即神經(jīng)元)的數(shù)目均明顯高于對照組。新生少突膠質(zhì)細(xì)胞(BrdU+/04+)在不同

6、分布區(qū)域的數(shù)量依次為胼胝體、嗅球、隔核、紋狀體，且實驗組新生少突膠質(zhì)細(xì)胞明顯高于對照組。新生星形膠質(zhì)細(xì)胞(BrdU+/GFAP+)在不同分布區(qū)域數(shù)量依次為嗅球、紋狀體、胼胝體，且實驗組新生星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯高于對照組。 結(jié)論： 1、3日齡新生SD大鼠雙側(cè)頸動脈結(jié)扎，可建立腦白質(zhì)損傷為主的腦缺血模型，胼胝體變薄、側(cè)腦室擴(kuò)大、髓鞘形成減少。 2、3日齡新生SD大鼠腦缺血后神經(jīng)干細(xì)胞不受累，提示我們P3大鼠神經(jīng)干細(xì)胞