張?zhí)品▽W(xué)術(shù)思想整理及夾脊電針對(duì)腰椎間盤(pán)退變的保護(hù)作用研究.pdf

1、第一部分、張?zhí)品ㄡ樉呐R證學(xué)術(shù)思想淺析
　　湖北名中醫(yī)張?zhí)品ㄖ魅吾t(yī)師治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，勤求古訓(xùn)，學(xué)貫中西，具有豐富的針灸臨證經(jīng)驗(yàn)和獨(dú)特的學(xué)術(shù)思想。其在針?lè)ㄉ仙瞄L(zhǎng)捻轉(zhuǎn)無(wú)痛進(jìn)針；強(qiáng)調(diào)疏穴簡(jiǎn)針，氣至病所；注重治神、得氣與守氣；臨證主張辨證、辨病、辨經(jīng)結(jié)合，針灸、針?biāo)幉⒂?；崇尚臨床研究型道路，力推中西醫(yī)結(jié)合為發(fā)展針灸學(xué)的重要途徑。
　　第二部分、夾脊電針對(duì)腰椎間盤(pán)退變的保護(hù)作用及其機(jī)制研究
　　目的：
　　研究夾脊電針治療腰椎間盤(pán)

2、突出癥（LDH）的臨床療效，并在首先證實(shí)夾脊電針對(duì)模型兔退變腰椎間盤(pán) MRI、細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）表達(dá)影響的證據(jù)基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究夾脊電針調(diào)控腰椎間盤(pán)細(xì)胞凋亡，繼而影響椎間盤(pán)基質(zhì)調(diào)節(jié)因子的表達(dá)，糾正基質(zhì)降解和合成代謝之間的失衡，延緩椎間盤(pán)退變，促進(jìn)椎間盤(pán)修復(fù)與再生的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　選取我科符合納入標(biāo)準(zhǔn)的29例LDH患者，每天給予電針治療1次，連續(xù)6次為1療程，間隔1天后再進(jìn)行下一個(gè)療程，共治療2個(gè)療程。治療前后

3、通過(guò)改良版本的Oswestry功能障礙指數(shù)問(wèn)卷表對(duì)患者進(jìn)行綜合評(píng)估，治療結(jié)束后通過(guò)改良版的Macnab療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估患者的臨床療效。另外，選用36只清潔級(jí)成年新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常組、假模型組、模型組和夾脊電針組（治療組），每組9只。參照Kroeber M等的造模方法，采用克式針橫穿椎體后椎體間加壓建立腰椎間盤(pán)退變模型。模型組于造模成功（椎體間加壓28d）后，繼續(xù)行椎體間加壓28d，不作任何治療；治療組于造模成功后第1天開(kāi)始行L4、

4、L5夾脊電針治療，連續(xù)治療6d為1療程，療程間隔1d，共治療4個(gè)療程，治療周期28d；假模型組同模型組，但不進(jìn)行椎體間加壓，不做任何治療；正常組自然飼養(yǎng)，不作任何治療。各組分別在第1d、28d和56d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取3只，行L4-5椎間盤(pán)MRI平掃之后處死，取出椎間盤(pán)組織，從正中矢狀位將其分成兩部分，一部分供免疫熒光檢測(cè)，包括：ECM（COL-1、COL-2）、ECM調(diào)節(jié)因子（MMP-13、TIMP-1、BMP-2）；另一部分供Weste

5、rn Blot檢測(cè)，包括ECM（biglycan、decorin）、ECM調(diào)節(jié)因子（MMP-13、BMP-2）、凋亡相關(guān)基因（Bcl-2、Bax）。
　　結(jié)果：
　　1.夾脊電針治療LDH的臨床療效
　　經(jīng)過(guò)2周治療后，患者Oswestry功能障礙總評(píng)分較治療前有所下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；總有效率為89.66％。
　　2.夾脊電針對(duì)退變椎間盤(pán)MRI分級(jí)指數(shù)的影響
　　正常組椎間盤(pán)表現(xiàn)為均

6、勻明亮的高信號(hào)，所示椎間盤(pán)與鄰近節(jié)段的椎間盤(pán)信號(hào)無(wú)明顯差異。造模成功后的實(shí)驗(yàn)兔相應(yīng)腰椎間盤(pán)出現(xiàn)退變征象，其T2加權(quán)像呈低強(qiáng)度信號(hào)改變，較鄰近的上、下位椎間盤(pán)減低,椎間隙變窄,椎間盤(pán)變薄后突，部分可見(jiàn)腰椎不穩(wěn)畸形。
　　依據(jù)Pfirrmann’s MRI分級(jí)指數(shù)評(píng)估椎間盤(pán)退變的程度，正常組和假模型組在第28d與第56d T2加權(quán)信號(hào)均保持穩(wěn)定，分級(jí)指數(shù)為Ⅰ級(jí)；模型組和治療組第28d為IV級(jí)，模型組第56d信號(hào)降至最低，為IV-V級(jí)；

7、治療組第56d為III-IV級(jí)，與該組第28d及模型組第28d、56d相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.夾脊電針對(duì)退變椎間盤(pán)ECM的影響
　　免疫熒光檢測(cè)COL-1和COL-2顯示，模型組第28d、56d平均光密度顯著下降，與正常組和假模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療組第56d平均光密度明顯增加，與該組第28d和模型組第28d、56d相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　W

8、estern blot檢測(cè)biglycan和decorin顯示，正常組和假模型組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均無(wú)顯著性變化；模型組第28d、56d表達(dá)均明顯減少，與正常組和假模型組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（biglycan, P<0.01;decorin, P<0.05）。治療組第56d表達(dá)明顯增加，與該組第28d和模型組第28d、56d相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.夾脊電針對(duì)退變椎間盤(pán)ECM調(diào)節(jié)因子的影響
　　正常組

9、和假模型組各時(shí)間點(diǎn)之間MMP-13免疫熒光平均光密度和MMP-13/GAPDH平均值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；模型組第28d、第56d MMP-13表達(dá)均明顯增強(qiáng)，與正常組和假模型組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療組第56d MMP-13表達(dá)下調(diào)，與該組第28d和模型組第28d、56d相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　生物顯微鏡下發(fā)現(xiàn)TIMP-1在熒光激發(fā)下，胞漿清晰可見(jiàn)紅色熒光，其中各組第1d和正常組、假模型

10、組的第28d、56d時(shí)間點(diǎn)均呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性，模型組第56d時(shí)間點(diǎn)陽(yáng)性細(xì)胞最少、紅色熒光最弱（P<0.01），而治療組在第56d時(shí)間點(diǎn)則有所升高。
　　第28d，模型組和治療組的 BMP-2免疫熒光平均光密度和BMP-2/GAPDH平均值均較假模型組顯著下降（P<0.01）；第56d，治療組BMP-2免疫熒光平均光密度和BMP-2/GAPDH平均值較第28d時(shí)間點(diǎn)明顯升高，且較模型組第56d明顯升高（P<0.05）。
　　5.夾脊

11、電針對(duì)退變椎間盤(pán)凋亡調(diào)控基因表達(dá)的影響
　　各組第28d實(shí)驗(yàn)兔椎間盤(pán)組織中，模型組和治療組分別與假模型組Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)合模型組和治療組第28d MRI退變征象，說(shuō)明在模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中，Bcl-2蛋白表達(dá)減少，Bax蛋白表達(dá)增多。
　　各組第56d實(shí)驗(yàn)兔椎間盤(pán)組織中，治療組與模型組Bcl-2/GAPDH、Bax/GAPDH比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

12、0.05)，治療組Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)，Bax蛋白表達(dá)下調(diào)，說(shuō)明夾脊電針能上調(diào)模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中 Bcl-2蛋白表達(dá)水平，下調(diào)模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中Bax-2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.夾脊電針能有效改善LDH患者的癥狀，降低腰腿疼痛對(duì)日常生活和工作的影響。
　　2.對(duì)新西蘭大白兔進(jìn)行軸向椎間施壓28d， MRI檢查顯示模型兔腰椎間盤(pán)出現(xiàn)典型的退變征象，可制作較理想腰椎間盤(pán)退變動(dòng)物模型。且該造模方案可

13、操作性較強(qiáng)，可重復(fù)性較高，造模成功率較高。夾脊電針可改善退變腰椎間盤(pán)Pfirrmann’s MRI分級(jí)指數(shù)。
　　3.夾脊電針可上調(diào)ECM表達(dá)，如COL-1、COL-2、biglycan、decorin等。
　　4.夾脊電針可影響ECM調(diào)節(jié)因子的表達(dá)，如下調(diào)基質(zhì)分解代謝酶和退變標(biāo)志物 MMP-13；上調(diào)抗分解代謝酶 TIMP-1和合成代謝酶BMP-2，進(jìn)而糾正基質(zhì)降解和合成代謝之間的失衡。
　　5. Bcl-2、Bax

14、蛋白參與了實(shí)驗(yàn)兔腰椎間盤(pán)退變的進(jìn)程。模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中Bcl-2蛋白表達(dá)減少、Bax蛋白表達(dá)增多。夾脊電針可能通過(guò)上調(diào)模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中Bcl-2蛋白表達(dá)、下調(diào)Bax蛋白表達(dá)，使細(xì)胞凋亡的敏感性降低、抗凋亡能力增強(qiáng)，引起細(xì)胞凋亡減少，從而對(duì)模型兔腰椎間盤(pán)退變發(fā)揮調(diào)控作用。
　　6.夾脊電針通過(guò)上調(diào)模型兔退變腰椎間盤(pán)組織中 Bcl-2蛋白表達(dá)、下調(diào)Bax蛋白表達(dá)，使細(xì)胞凋亡的敏感性降低、抗凋亡能力增強(qiáng)，引起細(xì)胞凋亡減少，