2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:將體內(nèi)外感染BALBIc小鼠人巨細胞病毒(bLllmancytomegalovirus,HCMV)分離株UL83、U154基因進行遺傳變異分析,篩選影響病毒跨種屬感染的相關基因,為進一步探索其機制提供線索。 方法:(1)1.45x106 PFtJ/ml的HCMV ADl69株(本室保存)、3×105PFIJh'nl的山東株(山東醫(yī)學科學院惠贈)腹腔注射6~8周SPF級BAL,B/c小鼠1.0ml/只,雌雄各6只作為實驗組

2、,同時設立滅活病毒對照組和細胞對照組。一個月后取各組小鼠大腦皮質(zhì)組織接種人胚胎成纖維細胞(HF)進行病毒分離與鑒定(PCR,檢測HCMVUI,83)、RT-PCR檢測大腦組織勻漿中HCMV UL54基因的轉(zhuǎn)錄。將從小鼠體內(nèi)分離到的HCMV病毒命名為體內(nèi)株(下同)。(2)以MOI=100的HCMVADl69株接種至BALB/C小鼠原代胚胎成纖維細胞(MF)和HF細胞,鏡下逐日觀察HCMV特征性細胞病變效應(CPE)并傳代三次。待出現(xiàn)細胞病

3、變后采用PCR和RT-PCR檢測HCMV特異性基因IJL83、IE基因的復制和轉(zhuǎn)錄。將從MF中分離到的HCMV病毒命名為體外株(下同>。山東株、臨床分離株接種至HF細胞后進行傳代,分別命名為山東株和臨床分離株(下同)。(3)對各分離株提取DNA進行UL83、UL54基因全長的PCR擴增并測序,將得到的序列與其他皰疹類病毒的代表毒株以及MCMV進行比對,經(jīng)MEGA 4.0軟件分析繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。 結果:(1)1.45x106 P

4、FU/ml的HCMV ADl69株注射BALB/e小鼠,一月后取大腦皮質(zhì)組織勻漿直接接種HF,實驗組雌性小鼠病毒接種管出現(xiàn)細胞腫脹變圓,胞內(nèi)顆粒增多,折光性增強。將培養(yǎng)物連續(xù)傳代三次,仍然可觀察到明顯CPE。 6細胞培養(yǎng)物經(jīng)PCR檢測HCMV UL83基因為陽性。大腦組織勻漿直接進行HCMv UL54基因的RT-PCR檢測,結果為陽性。3×105PFU/ml的山東株、滅活病毒組、HF對照組、實驗組雄性小鼠,上述各項檢測均為陰性。(2)M

5、OI=100HCMV AD169株分別接種至MF細胞和HF細胞后,可觀察到MF細胞出現(xiàn)病毒所致CPE,與HF細胞上的CPE相似,細胞培養(yǎng)物均經(jīng)PCR、RT-PCR檢測HCMV UL83、IE基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,結果為陽性。(3)四株病毒的UL83、Ul54基因序列經(jīng)Clustal w軟件比對分析后發(fā)現(xiàn):UL83基因及其編碼氨基酸序列與Genebank公布的HCMV標準株相應序列的同源性在98%~100%之間,UL54基因及其編碼氨基酸序列

6、的同源性在99%~100%之間。在發(fā)生突變的核苷酸和氨基酸位點中,體內(nèi)株Ul83基因的第682~684位點由CTG突變?yōu)門CT,導致第228位氨基酸發(fā)生了亮氨酸到絲氨酸的突變。經(jīng)MEGA4.0軟件繪制系統(tǒng)進化樹后發(fā)現(xiàn):能夠適應小鼠體內(nèi)環(huán)境,并感染小鼠大腦皮質(zhì)的HCMV,其Ul83基因在進化樹上處在另一獨立的支群內(nèi),其余各株的UL83基因與標準株、Merlin、Towne處于同一支群。四株病毒的UL54基因處在同一支群。 結論:

7、從體內(nèi)外感染HCMV的BALB/c小鼠大腦組織與原代MF中分離得到了能在小鼠大腦組織與細胞中增殖復制的HCMV毒株。通過對各個毒株UL83、UL54基因全長的PCR擴增并測序,比對分析后發(fā)現(xiàn):體內(nèi)株UL83基因編碼的氨基酸序列在228位發(fā)生了突變,而此位點具有誘發(fā)細胞毒性T細胞(cytotoxie T lymphocyte CTL)反應的潛力。經(jīng)進化關系分析后發(fā)現(xiàn)能夠適應小鼠體內(nèi)環(huán)境,并感染小鼠大腦皮質(zhì)的HCMV ADl69株,其UL8

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