2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  本研究擬進(jìn)一步應(yīng)用3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成3T3-L1脂肪細(xì)胞,然后誘導(dǎo)成胰島素抵抗的3T3-L1脂肪細(xì)胞,通過(guò)檢測(cè)并比較胰島素抵抗后的3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取率及caveolin-1、IR、GLUT4以及ERS相關(guān)蛋白表達(dá)的改變,初步在細(xì)胞水平考察胰島素抵抗時(shí)caveolin-1與ERS的關(guān)系;進(jìn)一步在胰島素抵抗的3T3-L1脂肪細(xì)胞中轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)caveolin-1的慢病毒質(zhì)粒(LV-Cav1)及cave

2、olin-1沉默的慢病毒質(zhì)粒(LV-Cav1-RNAi),并葡萄糖攝取率及caveolin-1、IR、GLUT4以及ERS相關(guān)蛋白表達(dá)的改變,探討分析干預(yù)caveolin-1表達(dá)影響ERS改變對(duì)脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的作用。本研究將為探索脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的新機(jī)制,以及尋找改善胰島素抵抗的新手段提供重要的依據(jù)。
  實(shí)驗(yàn)方法:
  1、db/db小鼠30只機(jī)分配至3組:db/db組(10只),袖狀胃切除術(shù)組db/db-SG組(1

3、0只),假手術(shù)組db/db-sham組(10只);10只同窩野生型小鼠(db/m)作為陰性對(duì)照組db/m組(10只)參與實(shí)驗(yàn)。
  2、3T3-L1前脂肪細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化、建立胰島素抵抗模型成功后入選實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)觀察胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取,進(jìn)一步探討caveolin-1改善脂肪細(xì)胞胰島素抵抗作用的機(jī)制。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  一、手術(shù)結(jié)果
  SG組大鼠術(shù)后死亡1只,死因?yàn)槲呛峡诔鲅ㄐg(shù)后第1天),d

4、b/db-sham組術(shù)后7天死于切口感染1只,其他組無(wú)死亡。
  二、術(shù)后小鼠體重變化
  術(shù)前db/db-SG、db/db-sham及db/db組小鼠體重明顯高于db/m組,但db/db3個(gè)組別相比,組間體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)。術(shù)后1周起,db/db-SG、db/db-sham組小鼠體重均有不同程度降低,術(shù)后3周時(shí)體重有所增加,并維持在該水平。db/db-SG組降低明顯與其他兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

5、r>  三、術(shù)后攝食量的變化
  術(shù)前db/db各組間攝食量無(wú)顯著性差異。術(shù)后SG組攝食量明顯下降,21天時(shí)有略上升趨勢(shì),但仍低于其他兩組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。
  四、術(shù)前、術(shù)后空腹血糖(FBS)的變化
  術(shù)前db/db-SG組、db/db-sham組、db/db組FBS水平明顯高于db/m組,差異具有顯著性(P均<0.01)。術(shù)后30天時(shí)SG組FBS值已基本降至正常范圍,并與db/m組無(wú)顯著性差異

6、。
  五、術(shù)后口服葡萄糖耐量的變化
  術(shù)前db/db-SG組、db/db-sham組、db/db組OGTT曲線下面積(area under curve,AUC)值顯著大于db/m對(duì)照組(P均<0.05)。術(shù)后30天時(shí),SG組AUC值顯著降低,與db/m組無(wú)差異顯著性,db/db-SG組AUC值顯著低于db/db-sham和db/db組對(duì)照組(P<0.01)。
  六、術(shù)后血清胰島素的變化
  術(shù)前db/db-

7、SG組、db/db-sham組、db/db組小鼠基礎(chǔ)餐前胰島素水平無(wú)差異,且均高于db/m對(duì)照組(P<0.05),餐后胰島素水平進(jìn)一步升高,亦明顯高于對(duì)照組。術(shù)后SG組血清空腹胰島素及餐后胰島素水平下降,低于db/db-sham及db/db組(P<0.05),與db/m組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)。
  七、手術(shù)對(duì)db/db小鼠胰島素抵抗的影響
  術(shù)前術(shù)前db/db-SG組、db/db-sham組、db/db組小鼠HO

8、MA-IR值均顯著高于db/m組,表明術(shù)前db/db小鼠存在明顯的胰島素抵抗,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。術(shù)后SG組HOMA-IR值明顯降低,并與db/m組HOMA-IR值無(wú)明顯差異(P>0.05),而該兩組HOMA-IR值明顯低于db/db組及db/db-sham組,有顯著性差異(P<0.01)。
  八、手術(shù)對(duì)血清TC、TG、LDL的影響
  術(shù)前db/db-SG組、db/db-sham組及db/db組TC、TG

9、、LDL值顯著高于對(duì)照組(P均<0.01)。術(shù)后30天時(shí),SG組TC、TG、LDL值明顯下降,低于db/db-sham組及db/db組(P均<0.01)。
  九、手術(shù)對(duì)血清脂聯(lián)素的影響
  術(shù)前db/db-SG組、db/db-sham組及db/db組脂聯(lián)素水平顯著低于db/m對(duì)照組。術(shù)后30天時(shí),db/db-SG組脂聯(lián)素明顯升高,與db/db-sham組及db/db組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
  十、免疫組

10、織化學(xué)法檢測(cè)脂肪組織caveolin-1及GLUT4表達(dá)
  通過(guò)免疫組化檢測(cè)各組小鼠附睪脂肪組織caveolin-1及GLUT4的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與db/m小鼠比,db/db小鼠的caveolin-1及GLUT4的表達(dá)減弱;而與db/db小鼠比,db/db-SG組小鼠的caveolin-1及GLUT4的表達(dá)增強(qiáng),而db/db-sham組無(wú)明顯改變。
  十一、SG手術(shù)對(duì)小鼠脂肪組織caveolin-1、GLUT4、en

11、docanmRNA表達(dá)的影響
  Real-time quantitative PCR檢測(cè)小鼠附睪脂肪組織caveolin-1及GLUT4 mRNA相對(duì)表達(dá)量,結(jié)果顯示db/db-SG組小鼠脂肪組織caveolin-1及GLUT4mRNA表達(dá)較db/db組和db/db-sham組均明顯上升(p<0.05).
  十二、SG手術(shù)對(duì)小鼠脂肪組織caveolin-1、GLUT4、endocan及GRP78、IRE-1、XBP-1蛋

12、白表達(dá)的影響
  Western blot檢測(cè)小鼠附睪脂肪組織caveolin-1、GLUT4、endocan(ESM-1)以及ERS標(biāo)志物GRP78,IRE-1及XBP-1蛋白相對(duì)表達(dá)量,提示術(shù)后脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激程度明顯緩解至接近正常(p<0.01)。
  十三、3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及胰島素抵抗
  誘導(dǎo)胰島素抵抗后,脂肪細(xì)胞攝取熒光葡萄糖量明顯減少。
  十四、3T3-L1胰島素抵抗細(xì)胞GLUT4

13、、caveolin-1、ERS相關(guān)蛋白表達(dá)的變化
  通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)3T3-L細(xì)胞誘導(dǎo)前后GLUT4、caveolin-1的mRNA表達(dá)變化,表明誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞胰島素抵抗后,細(xì)胞的ERS反應(yīng)明顯增高。
  十五、caveolin-1干預(yù)的胰島素抵抗的脂肪細(xì)胞的構(gòu)建與驗(yàn)證
  證實(shí)了Cav1-shRNA慢病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染可明顯的下調(diào)caveolin-1的表達(dá),即caveolin-1沉默的細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

14、>  十六、caveolin-1沉默的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取能力的改變
  通過(guò)細(xì)胞攝取2-NBDG后,說(shuō)明caveolin-1沉默明顯的降低了3T3-L1細(xì)胞對(duì)胰島素刺激下的葡萄糖攝取能力。
  十七、caveolin-1過(guò)表達(dá)的脂肪細(xì)胞模型構(gòu)建與驗(yàn)證
  caveolin-1過(guò)表達(dá)的細(xì)胞模型構(gòu)建成功。
  十八、caveolin-1過(guò)表達(dá)的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取能力的改變
  通過(guò)細(xì)胞攝取2-NBDG后,流式檢

15、測(cè)caveolin-1過(guò)表達(dá)后細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度的變化,與NC轉(zhuǎn)染組比,Cav-1 cDNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度明顯增高,說(shuō)明caveolin-1過(guò)表達(dá)明顯的升高了3T3-L1胰島素抵抗細(xì)胞對(duì)胰島素刺激下的葡萄糖攝取能力。
  十九、干預(yù)caveolin-1表達(dá)對(duì)胰島素抵抗脂肪細(xì)胞GLU4表達(dá)及ERS功能的影響
  在3T3-L1胰島素抵抗脂肪細(xì)胞中轉(zhuǎn)染caveolin-1沉默的慢病毒質(zhì)粒(LV-Cav1-RNAi)72h

16、后,通過(guò)qRT-PCR和WB檢測(cè)了GLUT4的mRNA及蛋白表達(dá)水平,結(jié)果表明caveolin-1可負(fù)性調(diào)節(jié)ERS蛋白的表達(dá)。
  結(jié)論:
  1、SG術(shù)后短期內(nèi)db/db小鼠體重及攝食量明顯減低,血清TC,TG,LDL趨于正常,脂聯(lián)素水平上升,胰島素抵抗減輕。
  2、SG術(shù)能夠上調(diào)db/db小鼠脂肪組織caveolin-1、GLUT4及endocan(ESM-1)mRNA和蛋白的表達(dá),減輕炎癥反應(yīng),增強(qiáng)組織對(duì)葡萄糖

17、的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)。
  3、SG手術(shù)能夠抑制db/db小鼠脂肪組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路蛋白GRP78,IRE-1及XBP-1蛋白表達(dá),使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊蛋白質(zhì)能力增強(qiáng),緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高負(fù)荷,減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平,從而增加脂肪組織對(duì)胰島素的敏感性,改善脂肪組織的胰島素抵抗。
  4、3T3-L1前脂肪細(xì)胞可定向分化為成熟脂肪細(xì)胞,地塞米松可成功誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞胰島素抵抗。
  5、誘導(dǎo)3T3-L1分化成熟及胰島素抵抗后,脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取減少,ca

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