地黃寡糖對HepG2細(xì)胞（人肝癌細(xì)胞株）胰島素抵抗的改善作用及機制研究.pdf

1、目的：以中藥地黃的提取物——地黃寡糖為研究對象，采用HepG2細(xì)胞株，運用現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法和分子生物學(xué)研究方法，探討研究地黃寡糖對肝胰島素抵抗的改善作用及分子機制。 方法：用四甲基偶氮唑鹽(MTT)方法檢測HepG2細(xì)胞的增殖；同時采用高胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗細(xì)胞模型；檢測地黃寡糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響；分別采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶偶聯(lián)比色法、乳酸脫氫酶偶聯(lián)比色法、鉬酸銨定磷法及葸酮法測定

2、胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)葡萄糖激酶(GK)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性和糖原含量；運用RT-PCR技術(shù)，檢測地黃寡糖對胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)一些關(guān)鍵基因表達(dá)的影響，包括轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和調(diào)控細(xì)胞分化、脂代謝的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)和胰島素受體(IR)；調(diào)節(jié)體內(nèi)葡萄糖代謝的重要細(xì)胞因子葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GLUT2)。 結(jié)

3、果：在中濃度葡萄糖培養(yǎng)基中，高濃度(10～30 mg·L<'-1>)的地黃寡糖促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖，低濃度(0.1～3 mg·L<'-1>)則抑制HepG2細(xì)胞的增殖，作用呈明顯的量效關(guān)系；地黃寡糖(0.1～30 mg·L<'-1>)可促進(jìn)HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗，最佳濃度為10 mg·L<'-1>；地黃寡糖(0.1～100 mg·L<'-1>)能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗，增強對胰島素的敏感性，并且還能夠明顯對抗

4、高胰島素誘導(dǎo)的胰島素抵抗效應(yīng)，在一定程度上預(yù)防或逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的發(fā)展。地黃寡糖可降低胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，增強葡萄糖激酶的活性和增加糖原含量，改善HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的狀態(tài)。地黃寡糖能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表達(dá)；能夠明顯降低GLUT2基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：高濃度地黃寡糖促進(jìn)HepG2增殖，低濃度則抑制其增殖；地黃寡

5、糖可明顯地促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗，在一定程度上預(yù)防或逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的發(fā)展；地黃寡糖可以抑制胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的糖異生作用，減少細(xì)胞內(nèi)源性葡萄糖的產(chǎn)生，同時加快糖酵解的進(jìn)行，促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖的利用，增強細(xì)胞內(nèi)的糖原含量，對HepG2胰島素抵抗具有明顯的改善作用，其機制可能與激活PPAR-α、調(diào)節(jié)HepG2內(nèi)IR及GLUT2 mRNA的表達(dá)有關(guān)。該項研究初步闡明了地黃寡糖改善肝胰島素抵抗地作用及其分子機制，為地黃寡糖防