CD81、CLDN1基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒感染易感性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　丙型肝炎病毒(hepatitisC virus，HCV)可引起急、慢性病毒性肝炎，可發(fā)展成肝硬化、肝細(xì)胞癌、乃至肝衰竭。我國(guó)約有3700～4000萬(wàn)人感染HCV，且報(bào)告發(fā)病人數(shù)呈逐年升高。目前，國(guó)內(nèi)外推薦的抗病毒治療方案為聚乙二醇化干擾素結(jié)合利巴韋林的聯(lián)合治療，但仍有近半數(shù)的患者未能達(dá)到持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR)，宿主遺傳因素對(duì)于丙型肝炎的易感性、臨床表現(xiàn)及轉(zhuǎn)歸起到關(guān)鍵性的作用。其中CLDN1與CD81可相互作用，組成C

2、D81-CLDN1受體復(fù)合物，此復(fù)合受體在HCV入侵肝細(xì)胞中起關(guān)鍵作用。有研究表明CD81、CLDN1的SNP變異能夠影響機(jī)體某些免疫功能，而CD81、CLDN1這些基因序列的改變是否與丙型肝炎感染有關(guān)，本研究采用病例一對(duì)照方法對(duì)這一問題進(jìn)行探討。
　　方法：
　　1、研究對(duì)象
　　本研究采用病例對(duì)照研究方法，選取922例在2013年11月至2014年12月期間到中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診或體檢者為研究對(duì)象，其中病例

3、組包括461例慢性丙型肝炎患者，對(duì)照組包括461例沒有丙肝病史的健康體檢者。慢性丙型肝炎患者的抗HCV抗體陽(yáng)性且在隨訪期間均可檢測(cè)到一定量的血清HCV RNA。對(duì)照組與病例組研究對(duì)象基于年齡、性別、民族和居住地區(qū)等因素進(jìn)行匹配。
　　2、基因組DNA的提取
　　采用QIAamp⑩DNA Micro Kit(QIAGEN)從200μl全血樣本中提取基因組DNA，具體操作步驟參照其說明書進(jìn)行。
　　3、CD81、CLDN1

4、基因SNP檢測(cè)
　　采用HRM-PCR結(jié)合混樣法對(duì)研究對(duì)象CD81 rs708564和CLDN1rs893051基因SNP進(jìn)行檢測(cè)，并應(yīng)用LightCycler@480基因掃描軟件進(jìn)行結(jié)果分析。
　　4、測(cè)序驗(yàn)證
　　隨機(jī)抽取50份PCR產(chǎn)物樣本進(jìn)行直接測(cè)序，以驗(yàn)證HPM-PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行Hardy-Weinber

5、g平衡檢驗(yàn)，對(duì)照與病例組組間基因型分布差異采用X2檢驗(yàn)分析。丙型肝炎感染易感性與單基因多態(tài)性間的相關(guān)性用非條件Logistic回歸模型分析。所有的P值都是雙側(cè)概率，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1、研究對(duì)象基本特征
　　通過研究設(shè)計(jì)，對(duì)照與病例組組間年齡、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，兩組間的脂質(zhì)分布均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。同樣，比較兩組間脂質(zhì)分布的平均水平時(shí)，也未檢測(cè)到任何相關(guān)性。
　　2、將

6、對(duì)照組人群的基因型頻率進(jìn)行了遺傳平衡檢驗(yàn)，X2檢驗(yàn)結(jié)果顯示符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。
　　3、CD81rs708564和CLDN1 rs893051與HCV感染易感性的關(guān)系
　　病例組的CD81 rs708564 CC、CT和TT基因型分布頻率分別是18.2，55.3和26.5％，而對(duì)照組的基因型頻率分別是14.8，52.7和32.5％。比較病例與對(duì)照組的TT/CC和TT/CC+CT的基因型分布與HCV感

7、染的相關(guān)性強(qiáng)度分別為0.66(95％ CI:0.44-0.98，P=0.04)和0.75(95％ CI:0.56-0.99，P=0.04)，兩組間基因型分布頻率有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，與C等位基因相比較，T等位基因與HCV感染的相關(guān)性強(qiáng)度為0.82(95％ CI=0.68-0.99，P=0.04)。病例組的CLDN1rs893051 GG、GC和CC的基因型分布平率分別是63.1，33.2和3.7％，對(duì)照組的基因型分布頻率61.2，3

8、4.3和3.9％。GC/GG和CC/GG的基因型分布對(duì)HCV感染風(fēng)險(xiǎn)無(wú)影響，其相關(guān)性強(qiáng)度分別為0.95(95％ CI:0.72-1.25)和0.93(95％ CI:0.47-1.83)。
　　4、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051對(duì)HCV感染的聯(lián)合作用攜帶有CLDN1 GG純合體的HCV病例組的CD81 TT與CD81 CC相比，其基因型頻率顯著低于對(duì)照組(分別為24.7％和34.0％，P＜0.05)。CLD

9、N1 GG和CD81 TT同時(shí)出現(xiàn)與HCV感染的相關(guān)性強(qiáng)度為0.59(95％ CI=0.36-0.97)。
　　5、血清HDL-C、LDL-C水平對(duì)CD81 rs708564和CLDN1 rs893051與HCV感染易感性的影響
　　在低血清HDL-C和高LDL-C組，CD81 rs708564 TT純合體和T等位基因頻率與HCV感染的相關(guān)性強(qiáng)度分別為0.82(95％ CI:0.67-1.00，P=0.05)和0.43(95

10、％ CI:0.22-0.86，P=0.00)。而在高血清HDL-C組，CLDN1 rs893051 G/C雜合體頻率與HCV感染的相關(guān)性強(qiáng)度為0.40(95％ CI:0.18-0.86，P=0.02)。此外，在高血清HDL-C組，病例組CLDN1 C等位基因分布頻率顯著高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　1、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051 SNP位點(diǎn)可能影響中國(guó)漢族人群對(duì)HCV感染的易感性。
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