CD81、CLDN1基因多態(tài)性與丙型肝炎病毒感染易感性的相關性研究.pdf

1、目的：
　　丙型肝炎病毒(hepatitisC virus，HCV)可引起急、慢性病毒性肝炎，可發(fā)展成肝硬化、肝細胞癌、乃至肝衰竭。我國約有3700～4000萬人感染HCV，且報告發(fā)病人數(shù)呈逐年升高。目前，國內外推薦的抗病毒治療方案為聚乙二醇化干擾素結合利巴韋林的聯(lián)合治療，但仍有近半數(shù)的患者未能達到持續(xù)病毒學應答(SVR)，宿主遺傳因素對于丙型肝炎的易感性、臨床表現(xiàn)及轉歸起到關鍵性的作用。其中CLDN1與CD81可相互作用，組成C

2、D81-CLDN1受體復合物，此復合受體在HCV入侵肝細胞中起關鍵作用。有研究表明CD81、CLDN1的SNP變異能夠影響機體某些免疫功能，而CD81、CLDN1這些基因序列的改變是否與丙型肝炎感染有關，本研究采用病例一對照方法對這一問題進行探討。
　　方法：
　　1、研究對象
　　本研究采用病例對照研究方法，選取922例在2013年11月至2014年12月期間到中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院就診或體檢者為研究對象，其中病例

3、組包括461例慢性丙型肝炎患者，對照組包括461例沒有丙肝病史的健康體檢者。慢性丙型肝炎患者的抗HCV抗體陽性且在隨訪期間均可檢測到一定量的血清HCV RNA。對照組與病例組研究對象基于年齡、性別、民族和居住地區(qū)等因素進行匹配。
　　2、基因組DNA的提取
　　采用QIAamp⑩DNA Micro Kit(QIAGEN)從200μl全血樣本中提取基因組DNA，具體操作步驟參照其說明書進行。
　　3、CD81、CLDN1

4、基因SNP檢測
　　采用HRM-PCR結合混樣法對研究對象CD81 rs708564和CLDN1rs893051基因SNP進行檢測，并應用LightCycler@480基因掃描軟件進行結果分析。
　　4、測序驗證
　　隨機抽取50份PCR產(chǎn)物樣本進行直接測序，以驗證HPM-PCR結果的準確性。
　　5、統(tǒng)計學分析
　　應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行所有的統(tǒng)計學分析。對照組數(shù)據(jù)進行Hardy-Weinber

5、g平衡檢驗，對照與病例組組間基因型分布差異采用X2檢驗分析。丙型肝炎感染易感性與單基因多態(tài)性間的相關性用非條件Logistic回歸模型分析。所有的P值都是雙側概率，P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。
　　結果：
　　1、研究對象基本特征
　　通過研究設計，對照與病例組組間年齡、性別無統(tǒng)計學意義。此外，兩組間的脂質分布均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。同樣，比較兩組間脂質分布的平均水平時，也未檢測到任何相關性。
　　2、將

6、對照組人群的基因型頻率進行了遺傳平衡檢驗，X2檢驗結果顯示符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。
　　3、CD81rs708564和CLDN1 rs893051與HCV感染易感性的關系
　　病例組的CD81 rs708564 CC、CT和TT基因型分布頻率分別是18.2，55.3和26.5％，而對照組的基因型頻率分別是14.8，52.7和32.5％。比較病例與對照組的TT/CC和TT/CC+CT的基因型分布與HCV感

7、染的相關性強度分別為0.66(95％ CI:0.44-0.98，P=0.04)和0.75(95％ CI:0.56-0.99，P=0.04)，兩組間基因型分布頻率有顯著的統(tǒng)計學意義。此外，與C等位基因相比較，T等位基因與HCV感染的相關性強度為0.82(95％ CI=0.68-0.99，P=0.04)。病例組的CLDN1rs893051 GG、GC和CC的基因型分布平率分別是63.1，33.2和3.7％，對照組的基因型分布頻率61.2，3

8、4.3和3.9％。GC/GG和CC/GG的基因型分布對HCV感染風險無影響，其相關性強度分別為0.95(95％ CI:0.72-1.25)和0.93(95％ CI:0.47-1.83)。
　　4、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051對HCV感染的聯(lián)合作用攜帶有CLDN1 GG純合體的HCV病例組的CD81 TT與CD81 CC相比，其基因型頻率顯著低于對照組(分別為24.7％和34.0％，P＜0.05)。CLD

9、N1 GG和CD81 TT同時出現(xiàn)與HCV感染的相關性強度為0.59(95％ CI=0.36-0.97)。
　　5、血清HDL-C、LDL-C水平對CD81 rs708564和CLDN1 rs893051與HCV感染易感性的影響
　　在低血清HDL-C和高LDL-C組，CD81 rs708564 TT純合體和T等位基因頻率與HCV感染的相關性強度分別為0.82(95％ CI:0.67-1.00，P=0.05)和0.43(95

10、％ CI:0.22-0.86，P=0.00)。而在高血清HDL-C組，CLDN1 rs893051 G/C雜合體頻率與HCV感染的相關性強度為0.40(95％ CI:0.18-0.86，P=0.02)。此外，在高血清HDL-C組，病例組CLDN1 C等位基因分布頻率顯著高于對照組。
　　結論：
　　1、CD81 rs708564和CLDN1 rs893051 SNP位點可能影響中國漢族人群對HCV感染的易感性。
　　2