油茶籽殼提取物抗氧化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、油茶(Camellia Oleifera Abel.)為山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia)植物，是我國特有的木本油料樹種，茶籽(Camellia Oleifera Seed)為油茶的成熟種子，藥用歷史悠久，為常用藥用和食用品。油茶籽殼(Camellia Oleifera shell)為茶籽榨油后的副產(chǎn)物，是茶籽榨油前除去的種皮，其利用率相對較低。現(xiàn)代藥理對油茶籽殼中的活性成分及其化學(xué)結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)，其活性作用包括抗腫瘤、

2、免疫調(diào)節(jié)和抗氧化等。
　　本研究采用不同有機溶劑將油茶籽殼乙醇提取物分為乙酸乙酯、正丁醇、氯仿和水沉部分，測定油茶籽殼提取物主要活性成分，觀察提取物的體外抗氧化活性以及對人宮頸癌細胞株(HeLa)和人肝癌細胞株(HepG2)增殖的影響，探討不同濃度的油茶籽殼乙酸乙酯提取物對人肝癌細胞株(HepG2)增殖抑制作用，初步闡述油茶籽殼乙酸乙酯提取物對HepG2細胞凋亡誘導(dǎo)的影響。
　　試驗采用Folin-Ciocalteu和三氯化

3、鋁方法分別檢測總酚及總黃酮含量;采用DPPH法和鄰二氮菲-Fe2+氧化法測抗氧化活性;采用CCK-8法測細胞的活性。應(yīng)用流式細胞儀技術(shù)，通過AnnexinⅤ/PI凋亡試劑盒檢測油茶籽殼乙酸乙酯提取物誘導(dǎo)肝癌細胞株HepG2細胞凋亡的情況;采用PI染色檢測不同濃度的油茶籽殼乙酸乙酯提取物對肝癌細胞株HepG2細胞周期分布的影響，及對細胞周期阻滯的進行判斷。熒光定量PCR技術(shù)檢測油茶籽殼乙酸乙酯提取物對肝癌細胞株HepG2細胞內(nèi)Surviv

4、n、Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA水平的影響。
　　油茶籽殼乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、氯仿提取物、水提取物總酚含量分別為79.25±4.552、51.81±3.651、2.762±0.523、19.73±1.191mg/g;總黃酮含量分別為26.73±0.613、15.63±1.126、13.16±0.672、5.734±0.761mg/g，其中乙酸乙酯提取效率最高;油茶籽殼乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、氯仿

5、提取物、水提取物在15.625～250μg/mL范圍內(nèi)體外抗氧化活性均具有劑量依賴性;對HepG2細胞增殖抑制作用在62.5～250μg/mL范圍內(nèi)均具有劑量依賴性。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)經(jīng)藥物誘導(dǎo)處理后早期凋亡細胞、晚期凋亡和壞死細胞的含量均明顯上升趨勢，并呈現(xiàn)濃度依賴性;油茶籽殼乙酸乙酯提取物處理HepG2細胞，可以干擾細胞周期進程;使滯留于G0/G1期的細胞增多，阻止腫瘤細胞進入S期。熒光定量PCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)油茶籽殼乙酸乙酯提取物能

6、抑制Survivin表達及上調(diào)Caspase-3的表達，下調(diào)Bcl-2、上調(diào)Bax的表達。Survivin和Caspase-3之間兩者呈負相關(guān)，方差分析具有極顯著性(P＜0.01）;Caspase-3和Bax/bcl-2之間兩者呈正相關(guān)，方差分析具有極顯著性(P＜0.001); Survivin和Bax/bcl-2之間無統(tǒng)計學(xué)意義，故Survivin與Bax/bcl-2之間沒有相關(guān)性。綜上所述，油茶籽殼不同提取物均具有抗氧化和抗腫瘤活性