Acidiphilium DX1-1細(xì)胞壁相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、嗜酸桿菌屬是一種嗜酸化能異樣菌，該屬菌能夠進(jìn)行鐵呼吸，利用有機(jī)物或者H2還原Fe3+而獲得能量進(jìn)行生長(zhǎng)。常常與嗜酸氧化亞鐵硫桿菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）共同生活在一起，在浸礦過(guò)程中，具有重要的作用。本文通過(guò)構(gòu)建嗜酸氧化亞鐵硫桿菌細(xì)胞壁相關(guān)蛋白表達(dá)圖譜，從蛋白質(zhì)組學(xué)角度探討浸礦微生物表面結(jié)構(gòu)，為微生物與礦物表面的吸附機(jī)理研究提供一些依據(jù)。 本論文研究中，通過(guò)投射電鏡發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌體內(nèi)堆積大量的透

2、明顆粒，經(jīng)鑒定為聚-β-羥基丁酸酯（PHB）。本研究發(fā)現(xiàn)，在兩種不同的培養(yǎng)基中（硫酸鐵的有無(wú)），細(xì)菌聚集這種顆粒的能力具有很大的差異。詳細(xì)研究了不同培養(yǎng)條件下，菌體PHB的含量、細(xì)胞干重（CDW）、溶液中剩余葡萄糖的含量的變化，發(fā)現(xiàn)在不含有硫酸鐵的培養(yǎng)基中，PHB的含量可達(dá)40.9％CDW，而在含有硫酸鐵的培養(yǎng)基中，PHB的含量?jī)H為14.2％CDW。 本文通過(guò)提取了嗜酸桿菌細(xì)胞壁相關(guān)蛋白，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)先對(duì)酶解后的蛋

3、白進(jìn)行分離，分離后的肽片段直接進(jìn)入質(zhì)譜儀離子源進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜的分析。將得到286個(gè)肽質(zhì)量指紋圖譜用Mascot軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)搜尋得到蛋白相關(guān)信息，然后對(duì)每一個(gè)蛋白的輸出信號(hào)及亞細(xì)胞定位進(jìn)行預(yù)測(cè)。這些已鑒定的蛋白中51.4％有Sec-type信號(hào)肽，16.8％具有雙精氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)肽（Tat），27.3％的蛋白具有脂蛋白信號(hào)肽（Lipo），18.2％的蛋白為非經(jīng)典分泌蛋白（non-classically secreted protein

4、s），根據(jù)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)還有32.5％的蛋白也被認(rèn)為是目標(biāo)蛋白。按其功能分類(lèi)，38.14％的細(xì)胞壁相關(guān)蛋白質(zhì)為細(xì)胞包被， 11.51％的蛋白為轉(zhuǎn)運(yùn)與結(jié)合蛋白，12.61％的蛋白為假設(shè)蛋白，4.9％的蛋白為保守的假設(shè)蛋白，還有5.61％蛋白為功能未知蛋白，其他功能的蛋白含量都很少；這些蛋白質(zhì)的分子量主要分布在4000～160000Da，pH值主要分布在4～12之間，其中32.52％的蛋白質(zhì)的pH小于7，67.48％的蛋白質(zhì)pH大于7，2