表達傳染性法氏囊病毒VP5蛋白的DF-1細胞的質膜蛋白質組學分析.pdf

1、傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)感染引起的一種高度接觸性傳染病，主要侵害3-6周齡雛雞的法氏囊中樞免疫器官，導致以淋巴細胞衰竭、壞死為主要特征的一種免疫缺陷性和免疫抑制性疾病，是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。IBDV編碼的VP5蛋白可誘導細胞凋亡，與成熟病毒從胞內釋放到胞外及病毒的致病性有關，缺失VP5的研究成為防治IBDV的有效策略。聚集于細胞質膜上的IBDV/VP5蛋白對質膜組分的構成有何影響，以至是

2、否影響質膜的功能，至今缺少具體的實驗數(shù)據(jù)。本研究借助蛋白質組學方法對表達IBDV/VP5蛋白的細胞質膜進行蛋白質組學分析，以期在蛋白質組層面揭示VP5表達下細胞質膜的變化，為探索IBDV的浸染和釋放機制奠定基礎。
　　 二維凝膠電泳(2-DE)是一項被廣泛應用于復雜樣品分離的傳統(tǒng)蛋白質組學分離技術。本實驗中，以脂質體2000介導質粒DNA體外細胞轉染體系將IBDV/VP5基因導入DF-1細胞，抽提細胞的質膜進行2-DE電泳分析，

3、與正常細胞比較，從轉染VP5基因的細胞中獲得了45個顯著差異表達的蛋白點，包括33個表達上調蛋白點和12個下調表達蛋白點。挖取18個蛋白點進行MALDI-TOF/TOF質譜鑒定，對應15種蛋白的17個蛋白點（12種表達上調蛋白和5種表達下調的蛋白）被鑒定成功。數(shù)據(jù)庫搜索和對鑒定蛋白的功能分析表明，這些差異蛋白主要涉及信號傳導、跨膜轉運蛋白、離子通道蛋白。熒光實時PCR驗證結果顯示，差異表達蛋白基因轉錄本的變化趨勢與蛋白一致。此外，用We