基于5-HT1A受體介導(dǎo)的PKA信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)探討電針百會(huì)、神庭穴對(duì)MCAO-R大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響.pdf

1、目的:
　　觀察電針百會(huì)、神庭穴對(duì)大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注(middle cerebral artery occlusion andreperfusion，MCAO/R)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的治療作用并探討其可能的作用機(jī)制，為電針治療缺血性腦卒中后認(rèn)知障礙的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　將90只健康雄性Sprgue-Dawley大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(18只)和手術(shù)組(72只)，手術(shù)組參照線拴法制備MCAO/R大鼠模型

2、，假手術(shù)組只分離相應(yīng)血管，不予結(jié)扎和插入線栓。造模后剔除不合格者，將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的60只手術(shù)組大鼠隨機(jī)分為模型組、電針組及非穴組，各20只。電針干預(yù)于手術(shù)后第1天進(jìn)行，電針組取百會(huì)和神庭穴，非穴組取雙脅下非經(jīng)非穴，每天干預(yù)1次，每次30分鐘，共干預(yù)14天。于干預(yù)前、干預(yù)第1天、第7天及第14天采用進(jìn)行Zea-Longa神經(jīng)功能缺損評(píng)分;于干預(yù)前及干預(yù)第14天進(jìn)行小動(dòng)物核磁共振掃描;于干預(yù)前及干預(yù)第13天進(jìn)行跳臺(tái)實(shí)驗(yàn);于干預(yù)第10天至14

3、天進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn);取材后對(duì)左側(cè)海馬區(qū)5-羥色胺1A(5-hydroxytryptamine1A，5-HT1A)、α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid，AMPA)1、N-甲基-D天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid，NMDA)1、p-AMPA1(S845)和p-NMDA1(S897)受體的表

4、達(dá)，蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)活性及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　(1)神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦梗死體積:神經(jīng)功能缺損評(píng)分結(jié)果顯示:假手術(shù)組大鼠未表現(xiàn)出神經(jīng)功能缺損癥狀;電針組大鼠較模型組和非穴組神經(jīng)功能缺損評(píng)分下降(P＜0.05）;模型組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分同非穴組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。腦梗死體積檢測(cè)結(jié)果顯示:假手術(shù)組大鼠未觀察到腦梗死;在干預(yù)前，模型組、電針組及非穴組大鼠

5、腦梗死體積間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;干預(yù)14天后，與模型組和非穴組相比，電針組大鼠腦梗死體積顯著減小(P＜0.01);模型組與非穴組大鼠相比腦梗死體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　(2)學(xué)習(xí)記憶功能:跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在干預(yù)前，模型組、電針組及非穴組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）;干預(yù)14天后，與模型組和非穴組相比較，電針組大鼠潛伏期增加(P＜0.05），模型組大鼠潛伏期同非穴組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。水迷

6、宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比，模型組大鼠逃避潛伏期顯著增加(P＜0.01)，穿越平臺(tái)次數(shù)顯著下降(P＜0.01);與模型和非穴組相比較，電針組大鼠逃避潛伏期顯著下降(P＜0.01），穿越平臺(tái)次數(shù)增加(P＜0.05);模型組大鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)較非穴組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。在最后一天測(cè)試中，各組大鼠的游動(dòng)距離間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　(4)左側(cè)海馬區(qū)5-HT1A受體的表達(dá):免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示5-HT1

7、A受體在左側(cè)海馬CA1、CA3及DG區(qū)均表達(dá)，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠5-HT1A受體表達(dá)顯著升高（P＜0.01）;與模型組和非穴組相比較，電針組大鼠5-HT1A受體表達(dá)顯著降低(P＜0.05）;而模型組大鼠該指標(biāo)表達(dá)量較非穴組大鼠無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。Westem blot對(duì)5-HT1A受體表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果與上述結(jié)果基本一致。
　　(5)左側(cè)海馬區(qū)PKA活性及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度:與假手術(shù)組相比，模型組大鼠PKA活性及細(xì)胞內(nèi)

8、鈣離子濃度均降低（P＜0.05）;與模型及非穴組相比，電針組大鼠PKA活性及細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度顯著升高(P＜0.01);而模型組大鼠這兩個(gè)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果較非穴組大鼠無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　(6)左側(cè)海馬區(qū)AMPA1、NMDA1、p-AMPA1(S845)、p-NMDA1(S897)受體的表達(dá):Western blot結(jié)果顯示AMPA1、NMDA1受體在各組大鼠左側(cè)海馬區(qū)的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);對(duì)于p-AMP

9、A1(S845)、p-NMDA1(S897)受體，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的表達(dá)量顯著降低(P＜0.01），而與與模型及非穴組相比，電針組大鼠的表達(dá)量增加(P＜0.05），而模型組大鼠這兩個(gè)指標(biāo)的表達(dá)量較非穴組大鼠無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　(1)電針百會(huì)、神庭穴能夠發(fā)揮腦保護(hù)作用，改善MCAO大鼠腦損傷，促進(jìn)其神經(jīng)功能恢復(fù)。
　　(2)電針百會(huì)、神庭穴可以有效改善MCAO/R大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，