電針百余、四神聰MCAO模型大鼠Nogo-A、CaMll表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制做大腦中動(dòng)脈閉塞腦梗死(middle cerebralartery occlusion，MCAO)大鼠模型模擬腦卒中后認(rèn)知功能障礙(poststroke cognitive impairment，PSCI)，觀察電針百會(huì)、四神聰穴對(duì)MCAO模型大鼠Morris水迷宮(Morris water maze，MWM)測(cè)試成績(jī)及海馬區(qū)Nogo-A、CaMKⅡ蛋白表達(dá)的影響，從宏觀行為到微觀細(xì)胞和分子等多水平上探討電針治療PSC

2、I學(xué)習(xí)記憶障礙可能的作用機(jī)制，并為針灸治療PSCI提供理論和實(shí)踐依據(jù)。
　　方法:(1)對(duì)象篩選及分組:用MWM實(shí)驗(yàn)篩選出84只無(wú)學(xué)習(xí)記憶障礙大鼠;隨機(jī)分為正常組(n=12)、模型組(n=24)、假針刺組(n=24)、電針組(n=24)，4組又隨機(jī)分為1d、7d、14d和28d共4個(gè)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行觀察的4個(gè)亞組;除正常組外的3組大鼠均采用照改進(jìn)后的Longa方法制作左側(cè)MCAO模型;評(píng)價(jià)后造模成功的大鼠納入試驗(yàn)，不成功者剔除并補(bǔ)組。(2

3、)干預(yù)措施:正常組及模型組常規(guī)喂養(yǎng)，不給予任何處理，但在其它組實(shí)驗(yàn)時(shí)同等條件抓取;電針組給予針刺并加電針;假針刺組針灸針固定于穴位外而不刺入;針刺選穴“百會(huì)”、“四神聰”。(3)觀察指標(biāo):除MWM實(shí)驗(yàn)在造模后第7d、14d、28d進(jìn)行外，余各項(xiàng)指標(biāo)的觀察均在第1d、7d、14d、28d共4個(gè)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行。①大鼠行為學(xué)MWM實(shí)驗(yàn)，包括定位航行試驗(yàn)及空間探索試驗(yàn);②水迷宮試驗(yàn)后取材進(jìn)行HE染色觀察大鼠海馬腦組織病理學(xué)變化;③采用免疫組化檢測(cè)腦梗

4、側(cè)海馬區(qū)Nogo-A的表達(dá);④采用免疫組化檢測(cè)腦梗側(cè)海馬區(qū)CaMKⅡ的表達(dá)。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所得計(jì)量數(shù)值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示;實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistics19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;以P＜0.0為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且以P＜0.01為顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;定位航行試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用重復(fù)數(shù)據(jù)的多因素方差分析的方法，空間探索試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析進(jìn)行分析;免疫組化染色數(shù)據(jù)用單因素方差分析方法;并對(duì)數(shù)據(jù)行線性相關(guān)分析

5、;將所有數(shù)據(jù)及分析結(jié)果采用GraphPad Prism5軟件繪制成圖。
　　結(jié)果:①行為學(xué)MWM測(cè)試:模型組大鼠在定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)中均表現(xiàn)出明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙，電針組大鼠在兩類行為學(xué)測(cè)試中成績(jī)均明顯優(yōu)于模型組和假針刺組（P＜0.05），模型組與假針刺組MWM測(cè)試結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);②Nogo-A表達(dá)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:通過(guò)免疫組化檢測(cè)Nogo-A陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值，電針治療7d、14d和28d后Nogo

6、-A表達(dá)降低，和正常組、假針刺組相比，差異具有顯著意義(P＜0.01)。模型組與假針刺組Nogo-A的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);③CaMKⅡ表達(dá)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:模型組CaMKⅡ陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值低于正常組(P＜0.01)，電針治療7d、14d和28d后可增加CaMKⅡ的表達(dá)，和正常組、假針刺組相比，差異具有顯著意義(P＜0.01)。模型組與假針刺組CaMKⅡ的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;④行為學(xué)MWM測(cè)試成績(jī)與No

7、go-A表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，行為學(xué)MWM測(cè)試成績(jī)與CaMKⅡ表達(dá)呈正相關(guān)，Nogo-A表達(dá)與CaMKⅡ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:本研究通過(guò)制作PSCI模型，觀察電針“百會(huì)、四神聰”干預(yù)對(duì)MCAO模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及Nogo-A、CaMKⅡ表達(dá)的關(guān)系，得出如下結(jié)論:1.MCAO模型大鼠學(xué)習(xí)記憶力下降，MCAO模型能模擬PSCI大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能障礙;2.電針“百會(huì)、四神聰”穴可降低海馬內(nèi)Nogo-A表達(dá)，增加海馬內(nèi)CaMKⅡ的表達(dá);3.