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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:大量的臨床回顧性研究發(fā)現(xiàn),早期創(chuàng)傷性應(yīng)激事件,如年幼喪親、長(zhǎng)期與父母分離以及兒童期受虐或忽視等,可增加成年后抑郁、躁狂、精神分裂癥等精神疾病的發(fā)病率。研究資料說(shuō)明,單胺類神經(jīng)系統(tǒng)功能異常、下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-Pituitary-Adrenalaxis, HPA)的過(guò)度激活、腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)等可能參與早期應(yīng)激的過(guò)程。然而,由于臨床研究的周期長(zhǎng)、生物材料難以獲得和人體研究的道德要求等局限性,生命
2、早期應(yīng)激的動(dòng)物模型將為該領(lǐng)域的研究提供平臺(tái)。
目前被認(rèn)可的應(yīng)用于嚙齒類動(dòng)物的生命早期應(yīng)激是母愛(ài)剝奪模型,它能較好地模擬人類在生命早期母愛(ài)的喪失,并能觀察到成年后行為的改變。母愛(ài)剝奪模型主要分為兩種,第一種是短期的剝奪,如母子僅分離24小時(shí);第二種是長(zhǎng)期的剝奪,一般分為兩個(gè)階段:(1)母嬰分離階段(母乳期),(2)隔離飼養(yǎng)階段(斷乳后至成年)。其中母嬰分離相當(dāng)于人類在生命早期母愛(ài)的喪失,隔離飼養(yǎng)則相當(dāng)于人類在成年前社會(huì)交往行為的
3、減少或喪失。不多的母愛(ài)剝奪動(dòng)物模型的研究報(bào)導(dǎo)了母愛(ài)剝奪對(duì)動(dòng)物行為以及大腦神經(jīng)元再生、神經(jīng)生化改變的影響,母愛(ài)剝奪動(dòng)物模型將為生命早期應(yīng)激的研究提供良好的研究平臺(tái)。
因此,本研究擬1、建立“生命早期母愛(ài)剝奪導(dǎo)致成年后行為異?!钡拇笫髣?dòng)物模型,從母愛(ài)剝奪的時(shí)機(jī)和強(qiáng)度、行為學(xué)檢測(cè)手段等方面,選擇有效的刺激條件和檢測(cè)指標(biāo);從海馬5-HT1A受體的表達(dá)方面分析生命早期母愛(ài)剝奪導(dǎo)致成年后行為異常的機(jī)制;在此模型上研究成年后母愛(ài)剝奪大鼠對(duì)慢
4、性應(yīng)激的行為學(xué)反應(yīng)以及對(duì)海馬5-HT1A受體表達(dá)的影響。
實(shí)驗(yàn)一:
目的:以母愛(ài)剝奪為應(yīng)激手段,以自發(fā)活動(dòng)和穿梭逃避為行為學(xué)檢測(cè)手段,建立生命早期的應(yīng)激模型。觀察新生大鼠母愛(ài)剝奪對(duì)成年后行為和海馬CA1區(qū)5-HT1A受體表達(dá)的影響。
材料和方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為3月齡雌雄Sprague-Dawley(SD)大鼠,合籠生產(chǎn)后,新生鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為母愛(ài)剝奪組和正常對(duì)照組,母愛(ài)剝奪組(38只):出生后第2-21天
5、給予每天母嬰分離1h;正常對(duì)照組(20只):出生后正常飼養(yǎng),不給予任何處理。觀察新生期母愛(ài)剝奪對(duì)大鼠成年(2月齡)后行為(自發(fā)活動(dòng)和穿梭箱主動(dòng)回避反應(yīng)的習(xí)得率的變化)的影響,并以免疫組化技術(shù)檢測(cè)海馬CA1區(qū)5-HT1A受體蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Excel2000和SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,采用t檢驗(yàn)(T-test)進(jìn)行組間均數(shù)比較,P<0.05為差異顯著。
結(jié)果:
1.2
6、月齡時(shí)以開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)檢測(cè)大鼠的自發(fā)活動(dòng),比較母愛(ài)剝奪組與正常對(duì)照組大鼠自發(fā)活動(dòng)的總路程、休息時(shí)間、中央路程以及周邊路程。結(jié)果表明,以上各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明新生期母愛(ài)剝奪的大鼠剛剛進(jìn)入成年期的自發(fā)活動(dòng)與同齡正常大鼠無(wú)顯著差異。
2.2月齡時(shí)以穿梭試驗(yàn)檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,比較母愛(ài)剝奪組與正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)回避反應(yīng)的習(xí)得率,結(jié)果表明二者無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明新生期母愛(ài)剝奪的大鼠剛剛進(jìn)入成年期的學(xué)習(xí)
7、記憶能力與同齡正常大鼠比較無(wú)明顯差異。
3.免疫組化結(jié)果顯示5-HT1A受體陽(yáng)性細(xì)胞分布在海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體陽(yáng)性細(xì)胞,新生大鼠母愛(ài)剝奪后滿2月齡時(shí),大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達(dá)水平與Control組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
實(shí)驗(yàn)二:
目的:新生期接受母愛(ài)剝奪的大鼠成年后再次接受慢性應(yīng)激,觀察其對(duì)大鼠的自發(fā)活動(dòng)、學(xué)習(xí)記憶以及海馬CA1區(qū)5-HT1A受體表達(dá)的影響。
8、r> 材料和方法:母愛(ài)剝奪組(MD)和正常組(N)大鼠滿成年后,各分為2組,在2月齡時(shí)分為慢性應(yīng)激組和對(duì)照組,慢性應(yīng)激組接受10天慢性應(yīng)激,對(duì)照組正常飼養(yǎng),如此,四組動(dòng)物分別為:母愛(ài)剝奪+慢性應(yīng)激(MD+S)、母愛(ài)剝奪+對(duì)照(MD+C)、正常大鼠+慢性應(yīng)激(N+S)、正常大鼠+對(duì)照(N+C)。以開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)和穿梭箱主動(dòng)回避試驗(yàn)檢測(cè)大鼠的行為變化,運(yùn)用免疫組化技術(shù)對(duì)5-HT1A受體蛋白在海馬CA1區(qū)的表達(dá)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Excel200
9、0和SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SE)表示,采用單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗(yàn)(T-test)進(jìn)行組間均數(shù)比較,P<0.05為差異顯著。
結(jié)果:
1.無(wú)論是母愛(ài)剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時(shí)接受10天慢性應(yīng)激,與其對(duì)照組比較,開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)的總路程顯著減少(P<0.001)、休息時(shí)間均大幅度延長(zhǎng)(P<0.01)、中央路程顯著地減少(P<0.01)。MD+S與N+S比較,總路程大幅度
10、的減少(P<0.001)、休息時(shí)間休息時(shí)間大幅度延長(zhǎng)(P<0.01)、中央路程大幅度減少(P<0.01)。結(jié)果表明:慢性應(yīng)激可顯著地抑制大鼠的自發(fā)活動(dòng),而生命早期的母愛(ài)剝奪加重慢性應(yīng)激對(duì)自發(fā)活動(dòng)的抑制作用。
2.無(wú)論是母愛(ài)剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時(shí)接受10天慢性應(yīng)激,與其對(duì)照組比較,主動(dòng)回避反應(yīng)的習(xí)得率均有所降低(P<0.05)。MD+S與N+S比較,習(xí)得率顯著降低。結(jié)果表明:慢性應(yīng)激可抑制大鼠的的學(xué)習(xí)記憶能力,而生命早
11、期的母愛(ài)剝奪加重慢性應(yīng)激對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力的抑制作用。
3.無(wú)論是母愛(ài)剝奪大鼠還是正常大鼠,在2月齡時(shí)接受10天慢性應(yīng)激,與其對(duì)照組比較,大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達(dá)水平均顯著減少,有顯著統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。MD+S與N+S比較,大鼠海馬的CA1區(qū)的5-HT1A受體蛋白表達(dá)水平均顯著減少,有顯著統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)。
結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,母愛(ài)剝奪組子鼠每天從母鼠身邊移開(kāi)3 h,當(dāng)子鼠返回時(shí)母鼠不
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