雞源解淀粉芽孢桿菌的分離鑒定及其對肉雞的飼用效果.pdf

1、為尋找新型飼料添加劑，減少抗生素濫用帶來的危害，本試驗(yàn)擬從雞腸道中篩選出可作為雞的益生菌芽孢桿菌，開展本試驗(yàn)。
　　試驗(yàn)一：雞源芽孢桿菌的篩選和鑒定：在無菌條件下從一只健康肉雞內(nèi)臟中取出約1cm回腸樣，經(jīng)10ml滅菌生理鹽水洗去內(nèi)容物；回腸樣轉(zhuǎn)入含500μl0.016％二硫基蘇糖醇（DTT）的1.5 ml的離心管中，渦旋15 min以洗下小腸粘膜上的細(xì)菌；離心取上清液；上清液經(jīng)熱處理（65℃，45 min）以殺死細(xì)菌營養(yǎng)體，后以M

2、H平板分離出芽孢菌。上述芽孢菌液接入20 mlMH肉湯培養(yǎng)24 h，離心所得菌體分別經(jīng)模擬胃液和模擬小腸液處理12 h以選出耐受菌；耐受菌經(jīng)DSM液培養(yǎng)促進(jìn)芽孢生成，經(jīng)熱處理（65℃，45 min）后涂布于MH平板以選出多株耐受模擬胃液和模擬小腸液的芽孢菌。上述多株芽孢菌進(jìn)一步經(jīng)LBST瓊脂和含指標(biāo)菌(大腸桿菌E.coli K88)的MH瓊脂的檢測，篩選出淀粉酶、蛋白酶和抗菌物質(zhì)的外泌能力均最強(qiáng)的一株芽孢桿菌，并以16SrDNA分子生物

3、學(xué)分類法確認(rèn)其種屬屬性。
　　從耐受模擬胃液和模擬小腸液的53株芽孢菌中，分別經(jīng)53孔的LBST瓊脂平板、酪蛋白瓊脂平板和含指示菌（大腸桿菌E.coli K88）的MH瓊脂平板的檢測，篩選出淀粉酶、蛋白酶和抗菌物質(zhì)的外泌能力均較強(qiáng)的一株芽孢桿菌（編號為Y）；經(jīng)16S rDNA分子生物學(xué)分類法鑒定，此株菌為解淀粉芽孢桿菌，被命名為解淀粉芽孢桿菌Y。
　　試驗(yàn)二：芽孢桿菌篩選株對肉雞的飼用效果試驗(yàn)：600只11日齡麻黃公雞，隨機(jī)

4、分成4個(gè)飼糧組，每組3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)50只，分3個(gè)生長階段（11～21日齡、22～42日齡和43～70日齡）開展飼養(yǎng)試驗(yàn)。對于每個(gè)生長階段，4組雞分別飼喂4種試驗(yàn)飼糧（粉料）；試驗(yàn)雞自由采食飲水，每天24 h維持光照。對于每生長階段，4種試驗(yàn)飼糧的組成分別為：基礎(chǔ)飼糧；基礎(chǔ)飼糧+芽孢菌預(yù)混劑（10 mg.kg-1）（1×106 CFU/g）；基礎(chǔ)飼糧+芽孢菌預(yù)混劑（100 mg.kg-1）（1×107 CFU/g）；基礎(chǔ)飼糧+芽孢菌預(yù)混

5、劑（1000 mg.kg-1）（1×108CFU/g）。對每生長階段，測定各組生產(chǎn)性能指標(biāo)。在最后生長階段的結(jié)束時(shí)，從各組中采血清測定其生化指標(biāo)，采小腸樣測定小腸絨毛結(jié)構(gòu)指標(biāo)，采盲腸內(nèi)容物測定盲腸微生物指標(biāo)。
　　在肉雞生長的各個(gè)階段，總體上，解淀粉芽孢桿菌顯著性提高了肉雞的總增重、平均日采食量和平均日增重，降低了耗料增重比和死亡率，有促進(jìn)肉雞生長性能的作用。血清的總蛋白、白蛋白和球蛋白隨著芽孢添加量的增加而增加；血清的尿素氮、脂

6、多糖和丙二醛隨著芽孢添加量的增加而降低。對于空腸，各組的隱窩深度CD差異不顯著，但絨毛高度VH和VH/CD值均隨著芽孢添加量增加而增加；對于回腸，絨毛高度VH和VH/CD值均隨著芽孢添加量增加而增加，其中1000組均顯著高于對照組；而隱窩深度CD隨著芽孢添加量增加而降低。
　　盲腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)隨芽孢添加量增加而降低；乳酸菌數(shù)隨芽孢添加量增加而增加；因而，乳酸桿菌/大腸桿菌值隨芽孢添加量增加而增加，其中1000組顯著高于對照組。