芽孢桿菌bacillussp.的抑菌作用和抗菌蛋白基因tasa的克隆和表達(dá)

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文芽孢桿菌（Bacillus sp.）的抑菌作用和抗菌蛋白基因TasA的克隆和表達(dá)姓名：許曼琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)藥學(xué)指導(dǎo)教師：謝聯(lián)輝;段永平20050601福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本研究以植物根際分離到的2 4 株芽孢桿菌( B a c i l l u ss p ．) 菌株為對(duì)象，分別測(cè)定了其對(duì)植物病原真菌和細(xì)菌的拮抗效果，共篩選出1 2 株對(duì)植物病原菌抑制率較高的菌株，它們分別為A B 、V 3 、S

2、 A I 、3 - l 、N 8 一b 、V 5 、2 5 —1 、2 5 —2 、2 5 ．5 、2 5 ．9 、2 5 ．1 0 、2 5 ．1 7 。選擇其中抑菌效果較好且穩(wěn)定的幾個(gè)菌株對(duì)香蕉炭疽病菌( C o l i e t o t r i c h u mm u s a e ) 、立枯絲核菌( R h i z o c t o n i a s o l a n i ) 、香蕉枯萎病( F u s a r i u m o x y s

3、p o r u m f s p , c u b e n s e ) 等病原菌的抑菌機(jī)理進(jìn)行了研究，本論文重點(diǎn)研究了菌株2 5 ．1 、2 5 —1 7 對(duì)香蕉炭疽病菌的作用機(jī)理：平板對(duì)峙培養(yǎng)出現(xiàn)明顯的抑菌環(huán)；以凹玻片法，用兩菌株培養(yǎng)濾液處理病原菌分生孢子，其孢子萌發(fā)率明顯降低；將細(xì)菌培養(yǎng)濾液和孢子懸浮液涂布于P D A 平板上，兩菌株培養(yǎng)濾液均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。在普通光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察顯示，兩菌株均可抑制香蕉

4、炭疽病菌菌絲生長，造成菌絲分支增多，頂端和中央膨大，隨著時(shí)間的延長畸變結(jié)構(gòu)增加，菌絲呈念珠狀或菌絲分支顯著增多，且頂端細(xì)胞變形膨大聚集成簇，菌絲壁穿洞，內(nèi)含物質(zhì)泄漏，終使細(xì)胞崩解和消融，變成球狀的空泡。以芽孢桿菌菌株2 5 ．1 7 為材料，通過克隆測(cè)序獲得其編碼抑菌蛋白T a s A的基因全長，利用網(wǎng)上B L A S T n 、D N A m a n 和D N A c l u b 等生物信息學(xué)軟件對(duì)該基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該

5、基因共包含7 8 6 個(gè)堿基，與已發(fā)表的B a c i l l u ss u b t i l i s 全基因組序列( A c c e s s i o nN o ：Z 9 9 11 6 ) 中T a s A 基因( 與1 4 31 6 3 ～1 4 3 9 4 8 相對(duì)應(yīng)) 同源性達(dá)到9 9 ．2 4 ％，其中核苷酸的變異主要是同類堿基的轉(zhuǎn)換，即G ．A 或c ．T ；而且大多數(shù)變異發(fā)生在密碼子的第三位堿基上，并未引起蛋白質(zhì)水平上的變化。

6、該序列含有一個(gè)完整的開放閱讀框( O R F )和一個(gè)終止密碼子，該序列已經(jīng)登錄N C B IG e n b a n k ，登錄號(hào)為A J 8 7 1 3 8 6 。利用h t t p ：／／n p s a - p b i l ．i b c p ．f r ／c g i ．b i n ／s e c p r e d 在線分析預(yù)測(cè)了基因的_ m l r ．p lT a s A氨基酸序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)特征。本研究構(gòu)建了含T a s A 基因的融合蛋