外周血單核細(xì)胞及血栓素合成酶在糖代謝紊亂中的作用.pdf

1、目的：
　　探討外周血單核細(xì)胞在格列齊特緩釋片改善糖代謝紊亂中的作用，探討血栓素合成酶（thromboxane synthase,Tbxas）在糖代謝紊亂中的作用。
　　方法：
　　選取門診行OGTT新診斷且未經(jīng)任何降糖治療的2型糖尿病患者108例，基線評(píng)估后給予格列齊特緩釋片治療16周。于基線及第16周時(shí)測(cè)定空腹血糖、空腹胰島素、糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin,HbA1c）、糖化血清白蛋

2、白（glycated albumin,GA）、血常規(guī)、餐后2小時(shí)血糖及胰島素等。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR），胰島β細(xì)胞功能指數(shù)（homeostasis model assessment ofβ-cell function,HOMA-β）和體重指數(shù)（body mass index,BMI）,空腹進(jìn)行精氨酸刺激試驗(yàn)測(cè)定急性胰島素反

3、應(yīng)。于第2，4，8，12周訪視時(shí)測(cè)定空腹及餐后2h血糖。檢測(cè)KCNJ11 E23K基因多態(tài)性，比較不同基因型患者中格列齊特緩釋片的療效差異，比較治療前后外周血象、HOMA-IR、HOMA-β及急性胰島素反應(yīng)的變化及其關(guān)聯(lián)性。另外，收集經(jīng)腹部手術(shù)的人體內(nèi)臟及皮下脂肪組織各25例，包括正常體重組、肥胖組及糖尿病組，比較人體脂肪組織中TBXAS表達(dá)水平與BMI的關(guān)聯(lián)性，比較不同組中脂肪組織TBXAS表達(dá)水平的差異。分別培養(yǎng)小鼠3T3-L1前脂

4、肪細(xì)胞系、小鼠單核巨噬細(xì)胞系（RAW264.7）及小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，并用不同的免疫因子刺激，檢測(cè)不同刺激條件下Tbxas及血栓素A2受體(thromboxane A2 receptor,Tbxa2r)的表達(dá)情況。正常飲食飼養(yǎng)C57BL/6J野生型、ob/ob及Tbxas+/-小鼠，通過(guò)Tbxas+/-雜交培育 Tbxas基因敲除(knockout,KO,-/-)小鼠及Tbxas野生型(wildtype,WT,+/+)小鼠模型，并將四周齡

5、C57BL/6J野生型、Tbxas KO小鼠及Tbxas WT小鼠均給予高脂及低脂飲食。比較正常飲食C57BL/6J野生型小鼠與ob/ob小鼠、高脂所致肥胖小鼠脂肪組織中Tbxas及Tbxa2r表達(dá)水平。比較Tbxas KO及 Tbxas WT兩組小鼠的代謝指標(biāo)，外周組織胰島素敏感性，機(jī)體免疫指標(biāo)，脂肪組織中不同標(biāo)記物基因表達(dá)水平，脂肪組織特殊組織化學(xué)染色等。用SPSS20.0軟件及GraphPad Prism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

6、　　結(jié)果：
　　1.治療前，攜帶KK型患者口服葡萄糖后的血糖及血清胰島素水平均明顯高于EE或EK型患者。與攜帶E等位基因患者相比，KK型患者在治療期間空腹血糖水平較低，且更易達(dá)標(biāo)（Plog-rank=0.028）。治療16周后，攜帶K等位基因數(shù)量與Δ急性胰島素反應(yīng)呈明顯正相關(guān)，EK型患者Δ空腹胰島素及ΔHOMA-β明顯低于KK型患者。
　　2.格列齊特治療16周后外周血白細(xì)胞中僅單核細(xì)胞數(shù)明顯降低。基線外周血單核細(xì)胞數(shù)與腰圍

7、呈顯著正相關(guān)。腹型肥胖組Δ外周血單核細(xì)胞及Δ急性胰島素反應(yīng)明顯高于非腹型肥胖組，外周血單核細(xì)胞數(shù)與急性胰島素反應(yīng)呈正相關(guān)，但校正腰圍后無(wú)明顯相關(guān)性。
　　3.單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)可表達(dá)血栓素合成酶。Tbxas及Tbxa2r的表達(dá)在飲食所致肥胖(diet induced obesity,DIO)小鼠及 ob/ob小鼠脂肪組織中均顯著上調(diào)。肥胖或糖尿病人群內(nèi)臟脂肪組織TBXAS的表達(dá)明顯高于正常人群。Tbxas及Tbxa2r主要表達(dá)于脂肪

8、組織基質(zhì)血管成分(stromal vascular fraction,SVF)尤其是巨噬細(xì)胞，而非脂肪細(xì)胞。肥胖所致促炎因子可上調(diào)單核巨噬細(xì)胞中Tbxas及Tbxa2r的表達(dá)。低脂及高脂飲食組中，Tbxas KO及 WT小鼠的體重、身體成分、食物攝入量、耗氧量、能量消耗量、活動(dòng)量均無(wú)明顯差異。低脂飲食組，Tbxas KO小鼠血糖耐受能力及胰島素敏感性均高于WT小鼠，在皮下脂肪組織中，糖調(diào)節(jié)紊亂的改善與多種分泌代謝調(diào)節(jié)物（如Ctrp3，C

9、trp9及Ctrp12）的表達(dá)相關(guān)。相反，高脂飲食組中Tbxas KO小鼠的脂肪組織纖維化程度減輕，外周血清IL-6水平降低，但M1及M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)無(wú)明顯差異，且無(wú)明顯的機(jī)體糖代謝改善。
　　結(jié)論：
　　在中國(guó)漢族新診斷2型糖尿病患者中，KCNJ11 E23K多態(tài)性通過(guò)影響胰島β細(xì)胞功能而影響格列齊特療效，腰圍是影響格列齊特治療后外周單核細(xì)胞變化的主要因素，且外周血單核細(xì)胞參與影響格列齊特療效。由單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)表