PPARγ1對系膜細胞外基質(zhì)生成的抑制作用及其機制.pdf

1、第一部分,表達PPARγ1全長基因的質(zhì)粒構(gòu)建及在轉(zhuǎn)染的系膜細胞中的功能鑒定目的.過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome Proliferator- Activated Receptors γ, PPARγ1)屬于配體激活的核受體超家族成員之一.通常所說的 PPARγ就是 PPARγ1. PPARγ具有兩種配體,一種是天然性配體,如:游離脂肪酸及其代謝產(chǎn)物、15d-PGJ2;另一種是合成性藥物性配體,即噻唑烷二酮類藥物(TZD

2、s),與天然性配體相比較,TZDs類藥物具有親和性高、特異性強的特點.既往研究認為 PPARγ的作用與主要與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運和代謝途徑有關(guān).近年來研究發(fā)現(xiàn) PPARγ與一些疾病如糖尿病、肥胖、動脈粥樣硬化、高血壓及某些惡性腫瘤的發(fā)生也有密切的關(guān)系,而且其作用不局限于代謝效應(yīng),可能對炎癥、增殖、硬化等的發(fā)生發(fā)展具有直接的、非代謝性的對抗效應(yīng).國外大多數(shù)學(xué)者認為TZDs類藥物是通過 PPARγ的激活而產(chǎn)生相應(yīng)的作用,但是有少數(shù)研究結(jié)果指出以往認為的

3、 PPARγ的作用可能只是TZDs類藥物的自身作用而非 PPARγ1的直接作用,而目前絕大多數(shù)的研究仍然用的是TZDs類藥物.為了明確這個疑問,我們構(gòu)建了 PPARγ1全長表達基因的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染系膜細胞鑒定質(zhì)粒的功能,為進一步探討 PPARγ1在腎臟的作用機制提供有利的工具. PPARγ1全長表達基因質(zhì)粒的構(gòu)建為探討 PPARγ1的機制提供了有利的工作.第二部分, PPARγ1過表達抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生.PPARγ1的外源性

4、配體噻唑烷二酮類化合物(thiazolidinediones, TZDs)類藥物目前已作為胰島素增敏劑而廣泛應(yīng)用于臨床糖尿病的治療.近年來一些動物實驗和臨床研究顯示,TZDs在不同的疾病狀態(tài)下具有一定的腎臟保護作用,諸如糖尿病、高血壓、腎大部切除大鼠模型和腎炎大鼠模型等,但其具體機制不清楚.基于上述,我們應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將 PPARγ1的全長表達基因轉(zhuǎn)入大鼠系膜細胞,排除體內(nèi)各種干擾因素,探討 PPARγ1對高糖誘導(dǎo)的系膜細胞外基質(zhì)的非

5、代謝性作用.在不影響糖代謝的情況下, PPARγ1通過抑制ERK/AP-1及NFκB等信號的傳遞,來抑制高糖刺激下的系膜細胞細胞外基質(zhì)的合成,增加細胞外基質(zhì)的降解,減少細胞外基質(zhì)的積聚,同時降低AT1的蛋白表達.這為 PPARγ1具有直接抗硬化非代謝性效應(yīng)的推測提供了體外依據(jù).第三部分, PPARγ1過表達抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的系膜細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生.近年來研究發(fā)現(xiàn) PPARγ的配體在糖尿病腎病和非糖尿病腎病動物模型中均有不依賴于降血壓、

6、降血糖或降血脂的腎臟保護作用,能顯著抑制各種損傷導(dǎo)致的腎小球硬化.在這些腎病模型中腎內(nèi)局部的RAS都受到了激活,并且作為局部RAS系統(tǒng)最主要的效應(yīng)物血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)能夠誘發(fā)或加重細胞外基質(zhì)在腎臟的積聚.我們應(yīng)用現(xiàn)代基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將 PPARγ1的全長表達基因轉(zhuǎn)入大鼠系膜細胞,替代目前存在較大爭議的藥物和天然配體干預(yù)方法,來探討 PPARγ1對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的系膜細胞細胞外基質(zhì)的抑制作用. PPARγ1過表達能夠通過降低AT1受體