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文檔簡(jiǎn)介
1、目的：
探討Caveolae在高糖(High glucose，HG)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（Transforinggrowth factor，TGF-β1）誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(MCs)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)合成過(guò)程中的作用并探討其潛在的作用機(jī)制。
方法：
傳代培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(MCs)同步化后分為:(1)正常糖(NG)組;(2)高糖(HG)組;各
2、組繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞0、12、24、48h。不同濃度的葡萄糖/TGF-β1分別處理細(xì)胞1.5h，各組滲透壓均用甘露醇調(diào)整至30mmol/L以避免滲透壓不同對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的干擾。30mmol/L的葡萄糖短時(shí)處理細(xì)胞0-3h。經(jīng)甲基-β-環(huán)糊精(β-MCD)預(yù)處理1h的系膜細(xì)胞再分為兩組:(3)HG+β-MCD組;(4)HG+β-MCD+膽固醇(Cholestrol)組，各組繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞1、12、24、48h.用Western bloting檢測(cè)
3、小凹蛋白1（Cav-1）、磷酸化小凹蛋白1(p-cav-(l)y14)、1型膠原(Col-1)蛋白的表達(dá)水平，用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中Cav-1 mRNA表達(dá)變化，用ELISA方法檢測(cè)上清中纖維連接蛋白(FN)的蛋白含量。
結(jié)果：
1.與正常糖組相比，高糖或TGF-β1處理不同時(shí)間點(diǎn)FN濃度均顯著增加（均P＜0.01）;與HG0h組相比，高糖培養(yǎng)各時(shí)間點(diǎn)Col-1蛋白表達(dá)明顯增多(P＜0.05);與TGF-
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