來自深海宏基因組的鹽耐受相關(guān)基因的篩選及克隆.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩78頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、深海環(huán)境通常具有高鹽,高壓,低溫,無光照等特點,其海底沉積物的微生物往往具有適應(yīng)特殊環(huán)境的獨特生理代謝機制和分子細胞結(jié)構(gòu)。其特定的生態(tài)環(huán)境蘊藏著獨特而又極其豐富的微生物資源,其中大部分還鮮為人知,為研究中度嗜鹽菌鹽適應(yīng)機制提供了新的材料。面對海洋環(huán)境中隨時存在的失去胞內(nèi)外滲透壓平衡的威脅,大部分微生物在長期的進化過程中形成了其獨特的應(yīng)對機制,其中最重要的就是大多數(shù)中度嗜鹽菌通過在胞內(nèi)積累相容性溶質(zhì)來調(diào)節(jié)滲透壓的變化并維持細胞正常的代謝活

2、動。由于這是一種非常靈活的短期或瞬變的反應(yīng),隨外界滲透壓的變化而變化,它成為目前微生物滲透壓研究的模型和熱點。
   在文庫篩選過程中發(fā)現(xiàn)一株在6%NaCl濃度LB培養(yǎng)基中生長良好的克隆子FOS36K,在分析FOS36K的外源片段酶切圖譜的基礎(chǔ)上,選用BamHⅠ和NheⅠ依次進行兩次亞克隆,將FOS36K質(zhì)粒外源片段大小從36K縮小至9K,獲得了一株同樣有耐鹽特性的亞克隆FOS9K。分析FOS9K外源片段序列,含有六個ORF,推

3、測耐鹽特性的產(chǎn)生與其中ORF6(命名為putP-sea)單個基因的表達產(chǎn)物有關(guān)。putP-sea基因編碼產(chǎn)物為492個氨基酸,分子量約為53 kDa。通過互聯(lián)網(wǎng)對PutP-sea蛋白分別進行了氨基酸疏水性分析,發(fā)現(xiàn)PutP-sea蛋白存在11個疏水區(qū),說明PutP-sea蛋白是1個跨膜蛋白。將ORF6的序列在Genbank中用Blast軟件進行同源性比較,結(jié)果表明ORF6編碼的蛋白質(zhì)序列與Idiomarina balticaOS145來

4、源的Na+和脯氨酸轉(zhuǎn)運子(PutP)有82%的相似性。通過PCR的方法把包括整個putP-sea基因ORF框及可能的啟動子核苷酸序列在內(nèi)的2.2kb的片段克隆到pBR322載體上,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pBRputP-sea,轉(zhuǎn)化E.coli EPI300后得到轉(zhuǎn)化子為EPI/pBRputP-sea,其耐鹽特性和原始克隆子FOS36K類似,為此本研究認為ORF6為耐鹽相關(guān)基因。
   本研究使用了Red同源重組技術(shù),在E.coli EP

5、I300菌株中通過敲除染色體上的putP基因,構(gòu)建putP基因缺失的新菌株EPI-△putP。該菌株在含脯氨酸為單一碳源的M8基本培養(yǎng)基上不能生長,而將pBRputP-sea重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到EPI-△putP中,使該菌株在含脯氨酸為單一碳源的M8基本培養(yǎng)基上生長。說明putP-sea基因具有將外界脯氨酸轉(zhuǎn)運至胞內(nèi)的功能。在不同NaCl濃度的LB培養(yǎng)基中測定四種菌株胞內(nèi)自由脯氨酸含量,發(fā)現(xiàn)EPI/pBRputP-sea和EPI-△putP/

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論