深海放線菌分離和深海宏基因組文庫中潛在抗生素生物合成基因簇的研究.pdf

1、本文從20個深海沉積物樣品中選擇性地分離獲得放線菌400余株,涵蓋了放線菌亞綱7個亞目中的14個科,共16個屬,并首次發(fā)現(xiàn)可從深海沉積物中分離到Tsukamurella屬和Isoptericola屬的菌株。這些菌株可分為35個OTUs,其中包含有4個潛在新種；對這些菌株的生長鹽依賴特性的測定發(fā)現(xiàn)其中6株可能是海洋專屬性的放線菌；抑菌活性測定及其抗生素合成基因調查結果則暗示了所獲的這批深海放線菌菌株具有潛在產生新海洋天然活性產物的能力。<

2、br>　　 本文從東太平洋ES0303站點深海沉積物宏基因組文庫中篩選獲得了幾類典型抗生素生物合成基因簇的相似序列。其中黏粒20G5攜帶有31kb連續(xù)的PKS/NRPS基因,通過染色體步移法將第4個ORF的NRPS基因補充完整,原來長為31kb的20G5外源插入片段被延長至37kb。RT-PCR結果暗示該基因簇上游含有一個在三種宿主中均存在轉錄活性的天然啟動子序列。其PKS基因簇與海綿共生細菌中負責onnamides生物合成的PKS基

3、因的蛋白序列相似性達50％左右,其NRPS基因簇與Myxococcus xanthus腸桿菌素NRPS基因的蛋白序列相似性達到41％,暗示此基因簇可能是新穎的抗生素生物合成基因簇。
　　 嘗試把該PKS/NRPS基因簇在鏈霉菌中進行了異源表達:1)該黏粒中的單加氧酶基因在大腸桿菌中進行了超量表達,得到了66kD的可溶性融合蛋白；2)構建了可用于抗生素生物合成基因簇異源表達的新鏈霉菌宿主；3)對該黏粒進行了改造后導入鏈霉菌宿主,并