深海放線菌分離和深海宏基因組文庫(kù)中潛在抗生素生物合成基因簇的研究.pdf

1、本文從20個(gè)深海沉積物樣品中選擇性地分離獲得放線菌400余株,涵蓋了放線菌亞綱7個(gè)亞目中的14個(gè)科,共16個(gè)屬,并首次發(fā)現(xiàn)可從深海沉積物中分離到Tsukamurella屬和Isoptericola屬的菌株。這些菌株可分為35個(gè)OTUs,其中包含有4個(gè)潛在新種；對(duì)這些菌株的生長(zhǎng)鹽依賴特性的測(cè)定發(fā)現(xiàn)其中6株可能是海洋專(zhuān)屬性的放線菌；抑菌活性測(cè)定及其抗生素合成基因調(diào)查結(jié)果則暗示了所獲的這批深海放線菌菌株具有潛在產(chǎn)生新海洋天然活性產(chǎn)物的能力。<

2、br>　　 本文從東太平洋ES0303站點(diǎn)深海沉積物宏基因組文庫(kù)中篩選獲得了幾類(lèi)典型抗生素生物合成基因簇的相似序列。其中黏粒20G5攜帶有31kb連續(xù)的PKS/NRPS基因,通過(guò)染色體步移法將第4個(gè)ORF的NRPS基因補(bǔ)充完整,原來(lái)長(zhǎng)為31kb的20G5外源插入片段被延長(zhǎng)至37kb。RT-PCR結(jié)果暗示該基因簇上游含有一個(gè)在三種宿主中均存在轉(zhuǎn)錄活性的天然啟動(dòng)子序列。其PKS基因簇與海綿共生細(xì)菌中負(fù)責(zé)onnamides生物合成的PKS基

3、因的蛋白序列相似性達(dá)50％左右,其N(xiāo)RPS基因簇與Myxococcus xanthus腸桿菌素NRPS基因的蛋白序列相似性達(dá)到41％,暗示此基因簇可能是新穎的抗生素生物合成基因簇。
　　 嘗試把該P(yáng)KS/NRPS基因簇在鏈霉菌中進(jìn)行了異源表達(dá):1)該黏粒中的單加氧酶基因在大腸桿菌中進(jìn)行了超量表達(dá),得到了66kD的可溶性融合蛋白；2)構(gòu)建了可用于抗生素生物合成基因簇異源表達(dá)的新鏈霉菌宿主；3)對(duì)該黏粒進(jìn)行了改造后導(dǎo)入鏈霉菌宿主,并