細梗香草皂苷A制備工藝及藥代動力學研究.pdf

1、細梗香草(Lysimachia capillipes Hemsl.)為報春花科(Primulaceae)珍珠萊屬(Lysimachia)植物，具有清熱解毒、祛風、止咳、調(diào)經(jīng)、寧神等功效，民間用于治療感冒咳嗽、風濕痹痛、月經(jīng)不調(diào)、神經(jīng)衰弱和惡性腫瘤，其化學成分以黃酮類和皂苷類為主。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，細梗香草總皂苷是其抗腫瘤活性的有效成分，其中LC-A、LC-B、LC-C三個單體皂苷均具有顯著的抗腫瘤活性，但LC-B和LC-C溶血性較強，

2、制備成單體藥物具有一定的困難，LC-A溶血性低，抗腫瘤作用也較強，具有相對較大的研究利用價值。因此，本文以LC-A為研究對象，對其制備工藝和藥代動力學進行考察。
　　首先，本文采用水解的方法對LC-A標準品進行制備。利用氫氧化鈉對LC-B單體進行水解，再依次經(jīng)過大孔樹脂、反相硅膠柱純化得到單體化合物，經(jīng)質(zhì)譜和核磁鑒定，確定水解產(chǎn)物為LC-A，采用面積歸一化法經(jīng)高效液相-蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC-ELSD)進行標定后，確定含量大于

3、98％。
　　其次，本文以LC-A為指標性成分，建立了總皂苷水解液的HPLC-ELSD含量測定方法;通過單因素篩選和正交設計，對細梗香草總皂苷的水解時間、水解溫度、催化劑種類、濃度和投料比進行優(yōu)選，確定最佳水解工藝為:總皂苷投料比為1 g∶40mL，催化劑為0.08 mol·L-1的NaOH水溶液，水解溫度為50℃，水解時間為144 h。按照最佳工藝進行水解后，LC-A得率為39.77％;以LC-A轉(zhuǎn)移率和純度為綜合評價指標，通過

4、靜態(tài)吸附實驗篩選出HP-20為最佳樹脂，通過動態(tài)吸附實驗對上樣濃度、上樣量等因素進行考察，通過正交設計優(yōu)選上樣和洗脫參數(shù)，得到最佳工藝為:上樣濃度20 g·L-1，上樣量為80％飽和上樣量，重復上樣3次，吸附0.5 h，上樣流速為每小時2倍柱體積，徑高比1∶8，水洗脫3倍柱體積，40％乙醇洗脫3倍柱體積，70％乙醇洗脫4倍柱體積，流速每小時2倍柱體積。按照最佳工藝進行純化后，LC-A含量為63.25％，轉(zhuǎn)移率為71.36％;以LC-A純

5、度和含量為指標，采用單因素和正交試驗，對洗脫體積、上樣量和上樣濃度、洗脫流速進行考察，篩選出最佳的中壓反相色譜柱純化工藝為:上樣量為0.006倍柱體積、上樣濃度為0.1 g·mL-1、洗脫流速為每小時8倍柱體積、洗脫體積為14～17倍柱體積。按照最佳工藝進行純化，得到LC-A單體純度達到98％以上，得率為86.54％。
　　最后，本文建立了LC-MS/MS技術(shù)測定大鼠血漿、尿液和糞便中LC-A濃度的方法。大鼠體內(nèi)的藥代動力學結(jié)果表