TRIM22靶向調(diào)控eIF4E在白血病細胞粒系定向分化過程中的作用與機制.pdf

1、背景三基序蛋白TRIM22(tripartite motif22)，也被稱為Staf50(stimulatedtrans-acting factor of50 kD)，因其具有包含RING區(qū)，B-box區(qū)和卷曲螺旋區(qū)的RBCC結(jié)構(gòu)序列，而被歸于三基序蛋白TRIM家族中的一員。TRIM22是抑癌基因P53的靶基因之一，其過表達可以激活NF-κB，并且N端RING結(jié)構(gòu)域及C端SPRY結(jié)構(gòu)域?qū)ζ湓贜F-κB活動，抗病毒以及自身免疫疾病中的介導(dǎo)

2、過程十分重要。已有研究證明TRIM22呈現(xiàn)RING結(jié)構(gòu)域依賴性E3泛素連接酶活性，可參與病毒復(fù)制的抑制，具有抗腫瘤增殖作用，但其特定分子功能尚未闡明。真核細胞翻譯起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor4E，簡稱“eIF4E”)是一種帽結(jié)合蛋白，可以特異性地識別mRNA的5'端的帽子結(jié)構(gòu)，從而啟動翻譯。eIF4E過度表達會導(dǎo)致增加擴散，逃避凋亡，腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。血液腫瘤中，eIF4E

3、高表達在急性淋巴系統(tǒng)白血病中較少發(fā)生，在淋巴瘤，骨髓增生異常綜合癥，急慢性髓系白血病中較多見，對eIF4E基因表達水平的檢測對監(jiān)測AML疾病狀況有重要意義。
　　目的：探討在人急性髓系白血病細胞粒系分化過程中TRIM22的功能及與eIF4E的相互作用，從而進一步闡明TRIM22靶向調(diào)控eIF4E的機制，為白血病治療尋找新靶點提供重要依據(jù)。
　　方法：體外實驗建立ATRA誘導(dǎo)HL-60及NB4細胞分化模型，應(yīng)用RT-PCR，q

4、-PCR及Western Blotting技術(shù)檢測TRIM22與eIF4E的基因與蛋白表達的變化，并通過電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低或過表達TRIM22后，利用CCK-8和流式細胞術(shù)檢測其對細胞功能的影響，以及Western Blotting技術(shù)檢測對eIF4E蛋白表達水平的影響。最后采用免疫共沉淀實驗(CO-IP)驗證TRIM22與eIF4E的相互作用。
　　結(jié)果：ATRA誘導(dǎo)HL-60及NB4細胞后，TRIM22的基因及蛋白表達水平均升

5、高，eIF4E的基因及蛋白表達水平均降低。其中q-PCR檢測NB4細胞在誘導(dǎo)前后mRNA相對表達量由1.01±0.15逐漸升高到30.98±2.79(F=280.70，P=0.000)，Western blotting檢測其蛋白相對表達水平由0.22±0.03逐漸升高至0.51±0.05(F=51.43，P=0.000)。反之，eIF4E的mRNA相對表達量由1.01±0.09逐漸降低至0.47±0.06(F=20.52，P=0.000

6、)，蛋白相對表達水平由0.97±0.02逐漸降低至0.64±0.09(F=14.70，P=0.001)。流式細胞術(shù)檢測TRIM22過表達后ATRA干預(yù)組（78.8±2.0）％比空載體ATRA干預(yù)組（58.7±2.7）％的PE-CD11b表達水平高(t=9.54，P=0.000);共轉(zhuǎn)染后ATRA干預(yù)組（61.6±3.8）％比TRIM22過表達后ATRA干預(yù)組PE-CD11b表達水平（78.8±2.0）％低(t=8.19，P=0.000)

7、。過表達TRIM22組的NB4細胞72h后增殖抑制率（0.25±0.01）％高于空載體組(0.03±0.02)％(t=15.47，P=0.000)。同時，過表達TRIM22基因水平后，eIF4E蛋白水平會降低(t=4.99，P=0.007)。CO-IP實驗驗證TRIM22通過結(jié)合eIF4E而作用。
　　結(jié)論：在ATRA誘導(dǎo)HL-60，NB4細胞粒系分化過程中，TRIM22的mRNA及蛋白表達水平逐漸升高，而eIF4E的mRNA及蛋