白血病細胞NB4分化過程中HOXA7的表達及干預(yù)研究.pdf

1、目的:本課題旨在研究人急性早幼粒白血病(NB4)細胞增殖分化過程中同源盒基因(Homeobox genes，HOX)A7的表達情況及全反式維甲酸（All-Trans Retinoic Acid，ATRA）干預(yù)細胞后其表達的變化，從而探討HOXA7與急性白血病發(fā)生的關(guān)系。
　　方法:1.采用細胞培養(yǎng)技術(shù)體外培養(yǎng)NB4細胞株，作為急性早幼粒（M3型）白血病模型。2.細胞增殖-毒性實驗（Cell Counting Kit-8，CCK8）

2、，確定干預(yù)藥物的最適濃度及干預(yù)時間點。3.實驗分組（共四組）:(1)對照組(control):不加藥物，代之以等量1640培養(yǎng)液。(2) ATRA干預(yù)4h組:加入最適干預(yù)濃度的ATRA稀釋液培養(yǎng)細胞4小時。(3) ATRA干預(yù)48h組:加入最適干預(yù)濃度的ATRA稀釋液培養(yǎng)細胞48小時。(4) ATRA干預(yù)96h組:加入最適干預(yù)濃度的ATRA稀釋液培養(yǎng)細胞96小時。4.以ATRA持續(xù)干預(yù)各實驗組細胞，觀察各組細胞的表觀生長情況。5.采用瑞

3、氏姬姆薩染色法觀察、鑒定各組細胞核，細胞質(zhì)的變化及其生長分化情況。6.實時熒光定量PCR法，蛋白免疫印跡(Wrestem blot)法，免疫組織化學(xué)方法檢測各組細胞HOXA7基因及蛋白的表達情況，并分析其表達差異。7.所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0處理，采用方差分析，組間均用LSD法兩兩比較，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.CCK8細胞增殖-毒性實驗得出:ATRA最佳干預(yù)濃度為1μmol/l，過低濃度對細胞生長的影

4、響極小，過高濃度毒性大，容易導(dǎo)致細胞死亡。經(jīng)干預(yù)后，細胞增殖受到抑制，且48小時干預(yù)作用即很明顯，以后隨著干預(yù)時間的增加，細胞受抑制的作用更加明顯。最佳檢測時間點分別設(shè)為4小時，48小時和96小時。2.鑒定細胞形態(tài):采用瑞氏姬姆薩染色法驗證知培養(yǎng)細胞為急性早幼粒白血病細胞。正常組細胞經(jīng)培養(yǎng)后形態(tài)無明顯改變;各實驗組（培養(yǎng)4，48，96小時組）細胞形態(tài)改變，向成熟分化。胞核變得不規(guī)則，大小各異，可見分葉、腎形、蠶豆?fàn)?，?質(zhì)比例縮小。且培

5、養(yǎng)48小時，這些變化即很明顯。3.在NB4細胞的體外培養(yǎng)過程中，加入適宜濃度的ATRA于培養(yǎng)基持續(xù)干預(yù)細胞，各實驗組細胞增殖受到一定程度的抑制，開始向成熟細胞分化。4.本實驗中各實驗組的HOXA7基因表達都呈下降趨勢，正常對照組就有表達，在干預(yù)4小時后表達下降，但不明顯，干預(yù)48小時后下降明顯，而在干預(yù)96小時后表達更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論: HOXA7基因及蛋白在人急性早幼粒白血病NB4細胞中表達。濃度為1μmol/l