免疫磁珠分離人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的利用免疫磁珠快速分離、純化同質(zhì)性成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。 方法采集正常成人骨髓，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離出骨髓單個核細(xì)胞(MNCs)并培養(yǎng)擴(kuò)增，應(yīng)用免疫磁珠從MNCs中分離出Stro-1<'+>細(xì)胞，對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性方面的測定與分析，并與傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)法獲得的BMSCs相比較。通過流式細(xì)胞儀檢測Stro-1<'+>細(xì)胞表面標(biāo)記及細(xì)胞周期分布：通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；通過繪制細(xì)胞貼壁率曲線、生長曲線、體外擴(kuò)增曲線了解其體外

2、生長情況及擴(kuò)增能力；通過誘導(dǎo)成骨后堿性磷酸酶染色、Von Kossa 染色及 X 線衍射分析了解其成骨能力。 結(jié)果利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。與貼壁法獲得的BMSCs相比較，獲得的細(xì)胞克隆單一，幾乎無圓形細(xì)胞夾雜，貼壁率高，生長狀況良好，體外擴(kuò)增可達(dá)10<'6>～10<'7>數(shù)量級。免疫磁珠分離法對BMSCs細(xì)胞周期無明顯影響，其分離所得的BMSCs在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下具有良好的成骨分化能力。