骨髓間質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)外免疫調(diào)節(jié)的作用及其機(jī)制。 方法：從胚胎及Wistar大鼠股骨中分離培養(yǎng)間質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)克隆化分選出形態(tài)均一的細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)志以鑒定其純度。將分離培養(yǎng)的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞接種于96孔板，待其長(zhǎng)滿孔面積的80％～90％時(shí)用直線加速器以30GY劑量照射，然后與分離的外周血淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)3d，以單獨(dú)培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞為對(duì)照，加入ConA刺激68h，分別使用MTT法和3H-TdR法檢測(cè)MSCs對(duì)外周血淋

2、巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。采用RT-PCR和Real-timePCR檢測(cè)經(jīng)MSCs處理的人外周血淋巴細(xì)胞TGF-β1、IL-6、IL-8、IL-10的基因表達(dá)，以未經(jīng)MSCs處理的同一人外周血淋巴細(xì)胞標(biāo)本作對(duì)照。將SD大鼠的真皮移植到Wistar大鼠創(chuàng)口上，加壓包扎，同時(shí)將2×106的Wistar大鼠MSCs經(jīng)尾靜脈注射到Wistar大鼠體內(nèi)，以經(jīng)同樣手術(shù)處理而不注射MSCs的Wistar大鼠為對(duì)照。無(wú)菌分離Wistar大鼠外周血及脾臟淋巴

3、細(xì)胞，并用Wistar大鼠MSCs及ConA處理，以ConA單獨(dú)處理的Wistar大鼠淋巴細(xì)胞為對(duì)照。將2×106的MSCs在不同的時(shí)間點(diǎn)經(jīng)尾靜脈注射到Wistar大鼠體內(nèi)，在每次注射前經(jīng)尾靜脈采血測(cè)定外周血中CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞占整個(gè)淋巴細(xì)胞數(shù)量的比值。 結(jié)果：MSCs對(duì)ConA刺激的淋巴細(xì)胞增殖的影響與MSCs和淋巴細(xì)胞的比值有關(guān)，當(dāng)比值較大時(shí)MSCs對(duì)ConA刺激的淋巴細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，但是比值較小時(shí)反而會(huì)促

4、進(jìn)其增殖。MSCs對(duì)淋巴細(xì)胞分泌TGF-β1無(wú)顯著性影響，MSCs對(duì)ConA刺激的淋巴細(xì)胞分泌IL-6也無(wú)顯著性影響，卻促進(jìn)淋巴細(xì)胞分泌IL-10，減少淋巴細(xì)胞分泌IL-8。皮膚移植實(shí)驗(yàn)顯示MSCs能延長(zhǎng)異種移植皮膚的存活時(shí)間。經(jīng)MSCs作用的不同時(shí)間點(diǎn)Wistar大鼠外周血CD4+，CD8+淋巴細(xì)胞的數(shù)量比值沒(méi)有顯著性變化，而在體外實(shí)驗(yàn)中，MSCs只對(duì)經(jīng)ConA刺激的Wistar脾臟CD4+淋巴細(xì)胞有影響。 結(jié)論：MSCs能下