鐵過(guò)載對(duì)臨床患者及小鼠免疫細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討鐵過(guò)載(iron overload,IO)對(duì)臨床患者以及小鼠免疫細(xì)胞的影響。
　　方法：根據(jù)特點(diǎn)收集臨床鐵過(guò)載患者外周血，并收集正常人外周血作為對(duì)照組。用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血CD3+T及CD4/CD8比值, CD3+CD8-IFN-γ+(Th1)細(xì)胞、CD3+CD8-IL-4+(Th2)細(xì)胞,CD3+CD8+IFN-γ+(Tc1)細(xì)胞、CD3+CD8+IL-4+(Tc2)細(xì)胞;腹腔注射右旋糖酐鐵建立小鼠鐵過(guò)載模型，用流式

2、細(xì)胞術(shù)分析小鼠及外周血CD3+T、CD4/CD8比值及B220+B淋巴細(xì)胞比例；進(jìn)一步檢測(cè)小鼠外周血Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞以及Tc1細(xì)胞、Tc2細(xì)胞;用流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟CD8+T淋巴細(xì)胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin細(xì)胞因子的分泌情況，Annexin/PI標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。免疫磁珠分選小鼠脾臟細(xì)胞得到CD8+T淋巴細(xì)胞,RT-PCR檢測(cè)CD8+T淋巴細(xì)胞的IFN-γ、TNF-α、Granz

3、yme-B、perforin、bcl-2、bax基因表達(dá)?；钚匝踉噭┖袡z測(cè)活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平。
　　結(jié)果：
　　1.鐵過(guò)載患者淋巴細(xì)胞內(nèi)LIP水平明顯增長(zhǎng)，CD3+T淋巴細(xì)胞ROS明顯上升, P值均＜0.05。
　　2.鐵過(guò)載患者與對(duì)照組對(duì)比外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞比例明顯下降， CD4/CD8比值則明顯上升；Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明顯下降， P值

4、均＜0.05。
　　3.脾臟鐵染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LIP水平均提示發(fā)生小鼠發(fā)生鐵過(guò)載。
　　4.與對(duì)照組相比鐵過(guò)載組小鼠外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞中ROS明顯上升,P＜0.05。
　　5.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)以及比例(％)明顯降低,P值均＜0.05，中性粒細(xì)胞比例(%)明顯上升P＜0.05,但絕對(duì)數(shù)計(jì)數(shù)無(wú)明顯變化。
　　6.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞比例(%)顯著

5、下降，但CD4/CD8比值明顯上升, P值均＜0.05。
　　7.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠外周血Treg細(xì)胞比例(%)顯著上升， Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明顯下降, P值均＜0.05。
　　8.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠外周血CD3+CD8-T淋巴細(xì)胞凋亡率顯著上升；與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠外周血CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡率顯著上升, P值均＜0.05。
　　9.鐵過(guò)載組小鼠脾臟中CD8+T淋巴

6、細(xì)胞內(nèi)ROS水平約為對(duì)照組的1.73倍。顯著增加P＜0.05。
　　10.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠脾臟CD8+T淋巴細(xì)胞比例(%)降低為對(duì)照組的0.52倍，P＜0.05。
　　11.與對(duì)照組相比,鐵過(guò)載組小鼠脾臟 CD8+T淋巴細(xì)胞分泌的 IFN-γ， Granzyme-B明顯降低；小鼠脾臟 CD8+T淋巴細(xì)胞中 IFN-γ（x10-4）基因表達(dá)Granzyme-B基因表達(dá)顯著下降，P＜0.05。
　　12.與對(duì)照組

7、相比，脾臟 CD8+T淋巴細(xì)胞凋亡率(%)明顯增高，P＜0.01；脾臟CD8+T淋巴細(xì)胞中bcl-2基因表達(dá)明顯下降，而bax基因表達(dá)（x10-2）明顯上升，P＜0.01。
　　13.上述鐵過(guò)載對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞的作用可經(jīng)祛鐵以及抗氧化治療后可部分逆轉(zhuǎn)。
　　結(jié)論：
　　鐵過(guò)載通過(guò)上調(diào) ROS影響患者及小鼠外周血淋巴細(xì)胞比例，抑制 CD3+T的比例，上調(diào)CD4/CD8比值,下調(diào)Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值，增加