鐵過載對(duì)骨髓造血功能的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討鐵過載對(duì)骨髓造血干祖細(xì)胞造血功能的影響及作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過4Gyγ射線全身照射和（或）右旋糖酐鐵腹腔注射建立正常和骨髓損傷情況下的鐵過載小鼠模型，通過①病理組織切片蘇木精-伊紅染色/普魯士藍(lán)鐵染色的方法分析鐵過載小鼠肝臟、脾臟、骨髓的形態(tài)及鐵沉積情況;②流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNCs)內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗(yàn)證鐵過載模型的成功建立。
　　2.使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)外周血

2、象及BMMNCs數(shù)目;采用流式細(xì)胞術(shù)分析各系造血細(xì)胞比例;采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)法檢測(cè)造血祖細(xì)胞增殖功能;采用競(jìng)爭(zhēng)性移植實(shí)驗(yàn)分析骨髓細(xì)胞移植后造血重建能力;采用磁珠結(jié)合流式細(xì)胞儀分選造血干細(xì)胞單克隆培養(yǎng)檢測(cè)造血干細(xì)胞增殖功能。
　　3.采用2'，7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)探針檢測(cè)鐵過載前后骨髓細(xì)胞活性氧(ROS)水平;使用Real-time PCR方法檢測(cè)ROS相關(guān)基因NOX4、GPX水平的表達(dá)。
　　4.

3、經(jīng)地拉羅司(DFX)去鐵或經(jīng)NAC抗氧化治療后，檢測(cè)上述指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠肝臟、脾臟、骨髓內(nèi)可見大量鐵沉積，BMMNCs內(nèi)LIP水平明顯升高，提示鐵過載模型成功建立;
　　2.和對(duì)照組相比，鐵過載組小鼠BMMNCs數(shù)目無明顯變化，紅系比例明顯降低，造血干細(xì)胞數(shù)目、造血細(xì)胞集落形成單位數(shù)(CFU-E，BFU-E，CFU-GM，CFU-mix)、每60孔造血干細(xì)胞單克隆形成數(shù)(32.00±5.25 vs

4、.51.00±4.24)、移植后造血干細(xì)胞重建能力均明顯減弱(均P＜0.05)，且總ROS、紅系ROS、造血祖細(xì)胞ROS、造血干細(xì)胞ROS分別升高1.43倍、1.42倍、1.94倍、3.48倍，經(jīng)去鐵或抗氧化處理后，上述改變部分恢復(fù)（均P＜0.05）;
　　3.和對(duì)照組相比，照射組小鼠血小板計(jì)數(shù)顯著降低，BMMNCs計(jì)數(shù)及紅系、髓系比例明顯降低，骨髓造血集落形成單位數(shù)、每20孔造血干細(xì)胞單克隆形成數(shù)(12.50±1.00 vs.1

5、6.00±0.80)明顯減少，移植后造血干細(xì)胞造血重建能力明顯減弱（均P＜0.05），說明骨髓損傷模型成功建立;和照射組相比，照射+鐵劑組小鼠血小板計(jì)數(shù)降低、白細(xì)胞升高、血紅蛋白量無明顯變化，脾臟可見髓外造血，紅系、髓系比例明顯降低，骨髓造血集落形成單位數(shù)、每20孔造血干細(xì)胞單克隆形成數(shù)(4.75±1.10 vs.12.50±1.00)減少更明顯，移植后造血干細(xì)胞造血重建能力明顯下降（均P＜0.05）;且總ROS、紅系ROS、髓系ROS

6、分別升高1.94倍、1.93倍、2.70倍(均P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.通過腹腔注射右旋糖酐鐵，成功建立了小鼠鐵過載模型。進(jìn)一步研究顯示鐵過載不但對(duì)肝臟、脾臟造成損害，而且可以損傷骨髓造血干祖細(xì)胞功能，但對(duì)骨髓功能的損傷未引起外周血象的顯著降低。
　　2.4Gyγ射線照射造成小鼠骨髓損傷，在此基礎(chǔ)上發(fā)生鐵過載會(huì)加重?fù)p傷造血干祖細(xì)胞功能，但由于髓外造血代償，鐵過載仍未引起外周血象顯著降低。
　　3.上述