海水鈍頂螺旋藻多糖對免疫低下小鼠及慢性乙型肝炎患者免疫功能的影響.pdf

1、[目的]: 從海南生產(chǎn)的海水鈍頂螺旋藻中提取多糖，并研究其對環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影響，及其對慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞免疫功能的影響，探討其在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中應(yīng)用可能性，為進(jìn)一步深入研究鈍頂螺旋藻多糖的功能和應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 [方法]： 采用改良的三氯乙酸法提取海水鈍頂螺旋藻多糖。用紅外光譜法測定鈍頂螺旋藻多糖分子結(jié)構(gòu)。用環(huán)磷酰胺腹腔注射法建立免疫功能低下小鼠的模型，再分別給予2mg/m

2、l、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖，運(yùn)用MTT法和比色法檢測各組小鼠脾細(xì)胞、胸腺細(xì)胞增殖能力和小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、分泌IL-1功能。用流式細(xì)胞術(shù)和 ELISA 法分別檢測細(xì)胞周期變化和小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清 IFN-γ濃度變化；采用Greiss法檢測各組小鼠巨噬細(xì)胞分泌NO功能。運(yùn)用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)分別測定鈍頂螺旋藻多糖對慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞周期的影響，采用ELISA 法檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清

3、細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4濃度，同時(shí)用RT-PCR法檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γmRNA的表達(dá)。 [結(jié)果]： 1．得到灰白色粉末狀海水鈍頂螺旋藻多糖，多糖含量92.62％。紅外光譜顯示鈍頂螺旋藻多糖的糖苷鍵為僅α-構(gòu)型，具有吡喃型糖環(huán)。 2．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能夠增強(qiáng)ConA或LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖和巨噬細(xì)胞吞噬功能，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。 3．模型對照組

4、小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞增殖明顯低于正常對照組，脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞細(xì)胞周期與正常對照組相比發(fā)生G0/G1期阻滯，2mg/ml、4mg/ml 和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞的增殖能力，使脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生S期和G2/M 期轉(zhuǎn)換。 4．模型對照組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能、分泌IL-1和NO濃度明顯低于正常對照組，2mg/m、4mg/m和8mg/m鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫

5、低下小鼠巨噬細(xì)胞的免疫功能。 5．模型對照組小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ濃度明顯低于正常對照組，2mg/ml、4mg/ml和8mg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ。 6．12.5μg/ml～1000μg/ml鈍項(xiàng)螺旋藻多糖能顯著增強(qiáng)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的增殖能力，并使其細(xì)胞周期發(fā)生S期和G2/M期轉(zhuǎn)換。 7．鈍頂螺旋藻多糖能顯著增強(qiáng)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞

6、分泌細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2，且能顯著降低慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-4。 8．100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml鈍頂螺旋藻多糖能顯著上調(diào)慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞IFN-γ mRNA的表達(dá)。 [結(jié)論]： 從海水鈍頂螺旋藻中成功分離得到具有免疫活性的鈍頂螺旋藻多糖，該多糖能夠提高環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能，對慢性乙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的免疫功能具有調(diào)