加味升降散抑制人胰腺癌細胞PANC-1的生長增殖及其初步機理研究.pdf

1、目的:本課題以人胰腺癌細胞PANC-1作為研究對象，分別比較不同時間，不同濃度下加味升降散對PANC-1細胞生長增殖的抑制作用，對細胞凋亡的誘導(dǎo)作用，同時與其主要成份姜黃素的作用效應(yīng)對比。初步探討加味升降散作用胰腺癌細胞的信號通路，抗腫瘤的分子機制，為加味升降散應(yīng)用于臨床治療胰腺癌提供相應(yīng)理論和實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用MTT法分別檢測不同濃度加味升降散(10、20、30、40、50mg/ml)和其主要效應(yīng)成分姜黃

2、素經(jīng)過24h、48h、72h作用對人胰腺癌細胞PANC-1生長增殖的影響，同時將兩者的抑制率進行對比。
　　2.采用Annexin V-FITC與碘化丙啶(promide iodine，PI)雙染色法，通過流式細胞儀分別檢測不同濃度加味升降散和其主要效應(yīng)成分姜黃素作用人胰腺癌PANC-1細胞48小時后對細胞凋亡的影響。
　　3.采用Western Blot法研究不同濃度加味升降散作用人胰腺癌細胞PANC-1后，對PI3/AK

3、T信號通路中P85、P110、AKT、P-AKT蛋白表達的影響，從而初步探討加味升降散作用人胰腺癌PANC-1細胞的分子機制。
　　結(jié)果:
　　1.加味升降散對人胰腺癌PANC-1細胞生長增殖的抑制作用在一定程度上呈時間和劑量依賴性，低濃度組(10mg/ml)作用不明顯，高濃度組具有明顯的抑制腫瘤細胞生長增殖的作用，其效果優(yōu)于陽性藥組及其主要效應(yīng)成分姜黃素組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。
　　2.經(jīng)不同濃度的加

4、味升降散和姜黃素作用于人胰腺癌細胞48h后，PANC-1細胞的總凋亡率隨著濃度升高而逐漸增加。低濃度組別細胞凋亡情況不明顯，但在高濃度藥物組別作用下，部分細胞形態(tài)發(fā)生改變，凋亡率呈劑量依賴性。加味升降散作用人胰腺癌細胞PANC-1的凋亡率高于同組別姜黃素。
　　3.經(jīng)不同濃度的加味升降散處理人胰腺癌細胞PANC-1后，PI3K的兩個亞基蛋白P85、P110的表達水平隨濃度增高而有所下降，總AKT表達水平變化趨勢不明顯，而磷酸化AK