轉(zhuǎn)基因生物Bt蛋白降解技術(shù)研究.pdf

1、本文主要以蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，簡(jiǎn)稱Bt)和轉(zhuǎn)Bt基因水稻秸稈為材料，研究紫外線輻照、60Coγ射線輻照、蛋白酶、土壤分離微生物對(duì)Bt蛋白的降解作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)紫外線輻照可以降解Bt細(xì)菌中的Bt蛋白，降解率與紫外燈功率，Bt細(xì)菌與紫外燈間距離及輻照時(shí)間有關(guān)。紫外燈功率越大、距紫外燈距離越小、輻照時(shí)間越長(zhǎng)，Bt蛋白降解率越高。在40 W紫外燈下20 cm處輻照24 h，Bt

2、蛋白基本完全降解。
　　 (2)60Coγ射線輻照可以降解Bt細(xì)菌中的Bt蛋白，Bt蛋白降解率隨60Coγ射線輻照劑量增大而提高，但輻照劑量超過2 kGy時(shí)，Bt蛋白降解率無(wú)顯著增加。
　　 (3)Bt細(xì)菌中提取的Bt蛋白在6 h內(nèi)基本不會(huì)降解，且在6 h內(nèi)溫度、振蕩等因素對(duì)Bt蛋白的降解無(wú)顯著影響。
　　 (4)在酶的最適作用條件下，所選7種蛋白酶均可降解Bt細(xì)菌中提取的Bt蛋白，但在30℃，pH7.0時(shí)只有菠

3、蘿蛋白酶、中性蛋白酶及堿性蛋白酶可以完全降解Bt蛋白。綜合考慮價(jià)格、應(yīng)用等因素后，最終選取中性蛋白酶作進(jìn)一步研究。向1 ml飽和Bt蛋白溶液中加入12 U中性蛋白酶，使二者在30℃下反應(yīng)20 min后，Bt蛋白可完全降解。中性蛋白酶也可降解轉(zhuǎn)Bt基因水稻秸稈中Bt蛋白，且降解率與酶底比、酶解溫度及酶解時(shí)間均呈正比。
　　 (5)從土壤中篩選出一株可高效降解Bt蛋白的FJB3細(xì)菌。將FJB3細(xì)菌培養(yǎng)24 h后，取0.05 ml發(fā)酵