Wnt1、β-catenin及LGR5在慢性淺表性胃炎中的表達.pdf

1、目的:Wnt/β-catenin信號通路是經(jīng)典的信號通路，其不僅可以調(diào)控和影響干細胞的自我更新和分化，還參與細胞增殖、分化、運動及凋亡等一系列過程，其異常激活或基因的異常表達與腫瘤發(fā)生發(fā)展緊密聯(lián)系，Wnt1作為Wnt大家族中的成員之一，在整個通路中它充當啟動因子，研究證實Wnt1與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，β-catenin，一種Mr92，000蛋白，對鈣粘著蛋白為基礎(chǔ)的上皮細胞粘附起作用，同時也是Wnt信號的主要調(diào)節(jié)物，其異常表達與腫瘤

2、患者不良預(yù)后相關(guān)。Lgr5(leucine-rich repeat-containing g-protein coupled receptor5)又名GPR49，屬于G蛋白耦聯(lián)受體家族，是最新發(fā)現(xiàn)的一種Wnt通路的靶基因，而且還是一種人類潛在的結(jié)腸癌干細胞標志物，已經(jīng)有研究表明lgr5在不同腫瘤組織中都大量表達，如食管癌、肝癌、結(jié)腸癌、基底細胞癌及卵巢癌等等，慢性淺表性胃炎(chronic superficial gastritis，C

3、SG)是多種誘因引起的慢性胃粘膜炎癥，屬于消化系統(tǒng)最普遍的疾病之一，治療不及時或治療不佳極易進一步發(fā)展為慢性萎縮性胃炎甚至發(fā)生癌變，本研究通過建立大鼠慢性淺表性胃炎的模型，觀察Wnt1、β-catenin及l(fā)gr5在大鼠慢性淺表性胃炎胃組織中表達情況，便于在早期發(fā)現(xiàn)其與胃癌發(fā)展的相關(guān)性，起到早期發(fā)現(xiàn)并預(yù)防胃炎向胃癌進一步發(fā)展。
　　方法:
　　1建立動物模型:隨機選取30只成年雄性7周齡Wistar大鼠進行編號、稱重，按隨機

4、數(shù)字表順序分為3組，即空白組，對照組、模型組，每組10只，空白組:不做任何處理，正常飼養(yǎng)。對照組:0.9％生理鹽水每日10ml/kg自由飲用6個月。模型組:0.02％氨水自由飲用（現(xiàn)配），饑飽失常（進食2天，禁食1天）。
　　2造模成功后，將大鼠麻醉處死，采用HE染色，免疫組化、westernblot和RT-PCR檢測各組中Wnt1、β-catenin以及l(fā)gr5的蛋白及基因的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1 HE染色結(jié)

5、果空白組和對照組顯示為正常腺胃組織，未見異常改變，模型組胃竇粘膜固有膜、粘膜肌及粘膜下大量炎細胞浸潤。
　　2 Western blot結(jié)果:在蛋白水平Western blot進一步驗證表明模型組中Wnt1、lgr5蛋白表達較空白組顯著增高(P＜0.05)，但空白組和對照組間表達量差異不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3免疫組化結(jié)果:Wnt1、β-catenin及Lgr5免疫陽性產(chǎn)物染色結(jié)果:Wnt1及Lgr5陽性

6、產(chǎn)物主要定位于細胞的胞質(zhì)和胞漿中，空白組和對照組組免疫陽性產(chǎn)物表達量較低，兩者之間差異不顯著，模型組表達量較正常組和鹽水組顯著增加(P＜0.05)，β-catenin的染色顯示空白組和對照組免疫陽性產(chǎn)物表達量較高，兩者之間無顯著差異(P＞0.05)，模型組表達量較空白組和對照組顯著減少(P＜0.05)。
　　4 RT-PCR結(jié)果:與空白組與對照組相比，模型組中Lgr5mRNA表達量增加(P＜0.05)，而空白組和對照組組間差異不顯

7、著，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1 Wnt/β-catenin信號通路中代表分子的異常表達或通路異常激活與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，Wnt1及l(fā)gr5在慢性淺表性胃炎組織中的表達量均高于對應(yīng)的空白組及對照組，而β-catenin表達為模型組較正常組及對照組偏低，提示W(wǎng)nt通路在炎性刺激的作用下可能已經(jīng)激活。
　　2 Lgr5是Wnt通路的一種靶基因，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，在我們研究中模型組中l(wèi)gr5