EGCG對胃癌細(xì)胞MGC803 RECK基因表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)對胃癌細(xì)胞系MGC803細(xì)胞RECK基因甲基化及其mRNA表達(dá)水平的影響，并探討核因子κB（NF-κB）在EGCG誘導(dǎo)RECK mRNA表達(dá)中的作用，從而為胃癌的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：用EGCG與培養(yǎng)的MGC803細(xì)胞作用相應(yīng)的時間，孵育結(jié)束后，提取細(xì)胞DNA，采用甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Methylation-spec

2、ific PCR，MSP)法檢測RECK啟動子區(qū)域的甲基化及非甲基化情況；同時采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測MGC803細(xì)胞內(nèi)RECK mRNA水平；提取細(xì)胞總蛋白和核蛋白，Western blot檢測p65的核轉(zhuǎn)位情況；為進(jìn)一步探討NF-κB與RECK基因表達(dá)的關(guān)系，MGC803細(xì)胞與25μM NF-κB特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）共同孵育，RT-PCR檢測

3、其對RECK表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）MSP結(jié)果顯示，MGC803細(xì)胞靜息狀態(tài)下，可檢測出RECK基因啟動子區(qū)域有明顯的甲基化條帶和非甲基化條帶。當(dāng)MGC803細(xì)胞與50μM EGCG孵育96h后，甲基化水平有所減弱，而非甲基化基因增多。
　　（2）EGCG能以劑量依賴性與時間依賴性方式促進(jìn)MGC803細(xì)胞 RECK基因mRNA的表達(dá)。
　　（3）MGC803細(xì)胞靜息狀態(tài)下在細(xì)胞核內(nèi)可檢測到p65蛋白。

4、當(dāng)其與50μM EGCG孵育后，p65的核轉(zhuǎn)位水平降低。
　?。?）NF-κB的特異性抑制劑PDTC能抑制MGC803細(xì)胞中p65核轉(zhuǎn)位水平，同時能增加RECK基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1. EGCG能降低MGC803細(xì)胞RECK基因啟動子區(qū)域的甲基化水平；
　　2. EGCG能以劑量和時間依賴性方式增高M(jìn)GC803細(xì)胞RECK基因mRNA的表達(dá)水平；
　　3. EGCG能抑制MGC803細(xì)胞內(nèi)NF-κ