表皮形態(tài)發(fā)生素在HIV與HCV共感染肝纖維化中的作用及機制.pdf

1、目前，在全球公共衛(wèi)生領域，HIV感染與HCV感染都嚴重威脅人類健康。由于具有相同的傳播途徑，HIV與丙型肝炎病毒(HCV)共感染非常普遍。在AIDS患者中，與HCV的共感染率可達25％，共感染率隨感染途徑而異，在靜脈藥癮患者中HIV/HCV共感染率約為60％。高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)改變了HIV感染的自然史，使大部分機會性感染的發(fā)生率明顯下降。HIV感染者生存期明顯延長，對于共感染者來說，HCV引起的肝炎、肝纖維化以及肝硬化已

2、成為影響其發(fā)病和死亡的重要原因之一。目前，HIV/HCV共感染患者肝損傷進展的機制尚未完全明確。
　　人表皮形態(tài)發(fā)生素(Epimorphin, EPM，Syntaxin-2)在正常肝臟主要表達于肝竇狀隙的肝星狀細胞（Hepatic stellate cells，HSCs）、匯管區(qū)的膽管與血管細胞，通過表皮與間質之間的相互作用調控表皮形態(tài)。在肝臟發(fā)育的過程中，HSCs主要通過自身表面特異性表達的EPM與肝臟干細胞直接接觸而促進肝干細

3、胞的定向功能性分化。前期，有報道發(fā)現在肝癌、乳腺癌、腸癌等腫瘤性疾病中，EPM也發(fā)揮了重要作用。目前，EPM在HIV/HCV共感染患者中肝纖維化快速進展過程中的作用及相關機制還不甚明確。
　　目的:
　　考察HIV/HCV共感染后EPM的表達變化，研究EPM是否能夠影響肝纖維化進展以及其相關分子機制。
　　方法:
　　1.HIV/HCV對肝星狀細胞(Hepatic stellate cell，HSC)的影響

4、>　　分別將HSC分為四組（對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組），分別通過細胞周期實驗與Transwell實驗，檢測共感染對HSCs增殖與遷移能力的影響。
　　2.HIV/HCV對肝星狀細胞基因表達的影響通過realtime-PCR、wesernblot檢測HIV/HCV共感染對HSC基因表達影響，相關基因表達包括α-SMA、 CollagenⅣ、TGF-β、EPM等。
　　3.EPM表達變化對HSC

5、的影響通過構建過表達與干涉表達EPM的肝星狀細胞，考察EPM對HSCs增殖與遷移的影響以及肝纖維化相關基因的影響。
　　4.EPM影響肝纖維化進展的機制研究使用Western Blot方法檢測肝纖維化相關基因的變化，EPM相關信號通路的變化，以及EPM調控的功能基因的變化，證明EPM影響肝纖維化進展的因素。
　　結果:
　　1.HIV//HCV共感染促進肝星狀細胞增殖、遷移
　　HSC的增殖與遷移對于肝纖維化及進

6、展有重要作用。我們分別將HSC分為四組（對照組、HIV感染組、HCV感染組、HIV/HCV共感染組），通過細胞周期實驗、MTT實驗以及Transwell實驗發(fā)現HIV/HCV共感染組HSCs的增殖與遷移能力明顯升高。
　　2.HIV/HCV共感染促進肝星狀細胞高表達EPM、TGF-β、α-SMA、CollagenⅣ的表達
　　為了檢測共感染后肝星狀細胞基因表達的變化，我們通過Q-CPR和WestenBlot實驗證明HIV/H

7、CV共感染能夠影響肝星狀細胞的多種基因表達。EPM作為肝內肝星狀細胞特異表達的蛋白也同時發(fā)生了上調。
　　3.EPM對于肝星狀細胞的影響
　　為了研究EPM對于肝星狀細胞的影響，我們對干涉及過表達EPM星狀細胞的增殖與遷移能力進行了檢測。EPM沉默之后，肝星狀細胞的增殖和遷移能力明顯下降。而過表達EPM后，肝星狀細胞的增殖和遷移能力明顯上升。因此，肝臟微環(huán)境中星狀細胞高表達的EPM能夠促進自身的增殖與遷移，從而促進肝纖維化的

8、進展。
　　4.EPM通過TIMP-1促進肝纖維化的進展
　　為了進一步研究EPM促進肝纖維化進展的分子機制，我們檢測了EPM對基質金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制劑家族(TIMPs)表達的影響。我們發(fā)現HIV/HCV共感染可以抑制MMP-3的表達，同時促進TIMP-1的表達。但EPM并不影響MMP-3的表達，但可以促進TIMP-1表達而影響肝纖維化的進展。
　　5.EPM通過FAK-ERK信號通路調控TIMP-1的表達

9、
　　我們發(fā)現HIV/HCV共感染組FAK-ERK表達明顯上調，EPM同樣能夠促進此信號通路激活。通過ERK抑制劑等實驗發(fā)現，ERK抑制后能顯著降低TIMP-1的表達，這證明EPM調控TIMP-1是通過FAK-ERK實現的。
　　結論：綜上所述，本課題通過考察HIV與HCV共感染后肝星狀細胞表達EPM的變化，并進一步研究了其變化后的作用和機制，證明EPM能夠促進肝星狀細胞的激活，并且能夠通過FAK-ERK途徑促進TIMP-1