CathepsinL在白藜蘆醇誘導(dǎo)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期阻滯中的作用.pdf

1、目的：
　　本課題以人腦膠質(zhì)瘤U251和U87細(xì)胞為模型，初步探討cathepsin L在白藜蘆醇(resveratrol)誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、凋亡中的作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性；集落形成以及annexin V/PI雙染流式實(shí)驗(yàn)檢測(cè) resveratrol對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U251和 U87的細(xì)胞毒性作用。Western blot檢測(cè)resveratrol對(duì)cathepsin L以及cyclin

2、A、cyclin B1、cyclin D1和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2/Bax表達(dá)水平的影響，免疫熒光染色檢測(cè)cathepsin L的變化。PI單染檢測(cè)藥物對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的影響。用siRNA干擾cathepsin L觀察resveratrol對(duì)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。U87細(xì)胞轉(zhuǎn)染p53突變質(zhì)粒后，觀察細(xì)胞對(duì)resveratrol的敏感性變化。
　　結(jié)果：
　　Western blot結(jié)果顯示resveratrol能夠顯著激

3、活cathepsin L,免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了給藥后膠質(zhì)瘤細(xì)胞 cathepsin L的增加。CCK-8、集落形成實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)及 western blot結(jié)果提示, resveratrol能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡；U87細(xì)胞對(duì)resveratrol的敏感性比U251細(xì)胞更強(qiáng)。PI單染流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明resveratrol可以引起U251細(xì)胞G1期阻滯，U87細(xì)胞為S期阻滯。Resveratrol可以明顯下調(diào)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)水平，表

4、明 resveratrol確實(shí)能夠誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期阻滯。在干擾cathepsin L以后由resveratrol引起的細(xì)胞毒性增強(qiáng)，克隆形成率明顯降低，細(xì)胞周期阻滯作用增強(qiáng)。U87細(xì)胞轉(zhuǎn)染p53突變質(zhì)粒后，細(xì)胞對(duì)resveratrol的敏感性減弱。
　　結(jié)論：
　　Cathepsin L參與了resveratrol對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其凋亡和細(xì)胞周期阻滯的作用，抑制cathepsin L可以增強(qiáng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)resver