白藜蘆醇誘導(dǎo)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化、凋亡及其相關(guān)基因解析.pdf

1、目的:觀察白藜蘆醇處理人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系Med-3,UW228-1,-2和-3前后對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞色素P450 1A1/1B1(CYP1A1,CYP1B1)表達(dá)特點(diǎn)的影響以及細(xì)胞周期的變化.以期探討白藜蘆醇對(duì)髓母細(xì)胞瘤的作用機(jī)制,最終為臨床改善髓母細(xì)胞瘤的治療現(xiàn)狀提供理論依據(jù).方法:四個(gè)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(Med-3和UW228-1,-2,-3)分別培養(yǎng)在含10﹪進(jìn)口胎牛血清的EMEM(Eagle's Minimum Ess

2、ential Medium)和DMEM(Ducbecoo's Modified Eagle's Medium)培養(yǎng)液中.分別以不同濃度的白藜蘆醇(0、50、75、100、150μM)處理各細(xì)胞系并觀察它們?cè)诓煌瑫r(shí)間點(diǎn)(0、24、36、48、60和72小時(shí))對(duì)靶細(xì)胞的作用特點(diǎn);細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和化學(xué)染色分析取自培養(yǎng)皿中鋪片中培養(yǎng)的細(xì)胞;細(xì)胞動(dòng)力學(xué)MTT法和Typran Blue計(jì)數(shù)法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響;組織病理學(xué)染色、凋亡核的

3、TUNEL標(biāo)記和流式細(xì)胞儀(FCM)技術(shù)判定被處理細(xì)胞的死亡性質(zhì);免疫細(xì)胞化學(xué)、Western、blot、RT-PCR及酶活性分析等方法系統(tǒng)地分析白藜蘆醇處理前后凋亡相關(guān)基因Fas、FasL和Caspase-3以及白藜蘆醇胞內(nèi)代謝酶CYP1B1和CYP1A1表達(dá)水平的改變及其與細(xì)胞分化和凋亡的關(guān)系;流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞周期的變化.結(jié)論:①該研究首次證實(shí):無(wú)明顯毒副作用的白藜蘆醇以劑量和時(shí)間相關(guān)性方式抑制人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-1,

4、-2,-3和Med-3的體外生長(zhǎng),其作用可能通過(guò)白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞周期G<,0>/G<,1>期的阻斷作用而實(shí)現(xiàn)的;②盡管四個(gè)細(xì)胞系的最初分化狀態(tài)不同,但白藜蘆醇都能促進(jìn)其細(xì)胞向更加成熟的方向分化,并在促進(jìn)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化的同時(shí),以Fas非依賴(lài)性分子通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,這將為白藜蘆醇有可能成為抗髓母細(xì)胞瘤用藥提供了一定的理論依據(jù);③CYP1A1而非CYP1B1可能參與白藜蘆醇在髓母細(xì)胞內(nèi)的代謝活化過(guò)程,因此,它有可能成為判定髓母細(xì)胞瘤化療效果