白藜蘆醇誘導髓母細胞瘤細胞分化、凋亡及其相關基因解析.pdf

1、目的:觀察白藜蘆醇處理人髓母細胞瘤細胞系Med-3,UW228-1,-2和-3前后對細胞生長、形態(tài)學改變、細胞色素P450 1A1/1B1(CYP1A1,CYP1B1)表達特點的影響以及細胞周期的變化.以期探討白藜蘆醇對髓母細胞瘤的作用機制,最終為臨床改善髓母細胞瘤的治療現(xiàn)狀提供理論依據(jù).方法:四個人髓母細胞瘤細胞系(Med-3和UW228-1,-2,-3)分別培養(yǎng)在含10﹪進口胎牛血清的EMEM(Eagle's Minimum Ess

2、ential Medium)和DMEM(Ducbecoo's Modified Eagle's Medium)培養(yǎng)液中.分別以不同濃度的白藜蘆醇(0、50、75、100、150μM)處理各細胞系并觀察它們在不同時間點(0、24、36、48、60和72小時)對靶細胞的作用特點;細胞形態(tài)學觀察和化學染色分析取自培養(yǎng)皿中鋪片中培養(yǎng)的細胞;細胞動力學MTT法和Typran Blue計數(shù)法檢測白藜蘆醇對細胞增殖活性的影響;組織病理學染色、凋亡核的

3、TUNEL標記和流式細胞儀(FCM)技術判定被處理細胞的死亡性質;免疫細胞化學、Western、blot、RT-PCR及酶活性分析等方法系統(tǒng)地分析白藜蘆醇處理前后凋亡相關基因Fas、FasL和Caspase-3以及白藜蘆醇胞內代謝酶CYP1B1和CYP1A1表達水平的改變及其與細胞分化和凋亡的關系;流式細胞技術觀察細胞周期的變化.結論:①該研究首次證實:無明顯毒副作用的白藜蘆醇以劑量和時間相關性方式抑制人髓母細胞瘤細胞系UW228-1,

4、-2,-3和Med-3的體外生長,其作用可能通過白藜蘆醇對細胞周期G<,0>/G<,1>期的阻斷作用而實現(xiàn)的;②盡管四個細胞系的最初分化狀態(tài)不同,但白藜蘆醇都能促進其細胞向更加成熟的方向分化,并在促進髓母細胞瘤細胞分化的同時,以Fas非依賴性分子通路誘導細胞凋亡,這將為白藜蘆醇有可能成為抗髓母細胞瘤用藥提供了一定的理論依據(jù);③CYP1A1而非CYP1B1可能參與白藜蘆醇在髓母細胞內的代謝活化過程,因此,它有可能成為判定髓母細胞瘤化療效果