GPR50通過調(diào)控Notch和Wnt-β-catenin信號通路促進神經(jīng)前體細(xì)胞的自我更新與神經(jīng)元分化.pdf

1、目的：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，神經(jīng)前體細(xì)胞是一種多潛能細(xì)胞，他能夠自我更新，同時也能分化形成神經(jīng)元、星型膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)前體細(xì)胞增殖、分化、遷移并最終形成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。上述任何一個過程的異常都會引起大腦的機能紊亂，并導(dǎo)致一些神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，如精神分裂癥、自閉癥和阿爾茨海默癥。最近的研究表明，在嚴(yán)重的抑郁癥和雙極情感障礙的患者中，神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化出現(xiàn)異常，這表明，神經(jīng)前體細(xì)胞在抑郁癥和雙極情感障礙患者的致病機理中發(fā)揮一定的作用。<

2、br>　　G蛋白偶聯(lián)受體50(GPR50)，亦叫褪黑激素相關(guān)受體或ML1X，是位于X染色體上的G蛋白偶聯(lián)受體。有研究表明，GPR50是重度抑郁癥和雙極情感障礙的一個風(fēng)險基因。有研究也表明，抑郁癥和雙極情感障礙可能與大腦皮層的發(fā)育異常相關(guān)，在成年哺乳動物的腦垂體、下丘腦、海馬中，GPR50有表達。此外，GPR50在胚胎13天的小鼠大腦中開始表達，在胚胎18天時表達量達到最高峰。這一系列的證據(jù)表明，GPR50在大腦的發(fā)育中可能起著很重要的作

3、用。但是，關(guān)于GPR50在大腦中的功能和機制仍不清楚，所以我們主要探索GPR50對神經(jīng)前體細(xì)胞的自我更新及分化的影響和分子機制。
　　方法：我們利用免疫熒光染色的方法，檢測GPR50在分離的神經(jīng)前體細(xì)胞和胚胎14天的小鼠大腦VZ區(qū)神經(jīng)前體細(xì)胞上的表達。分離胚胎發(fā)育14天的小鼠側(cè)腦室室管膜下區(qū)的神經(jīng)前體細(xì)胞，用含B27、EGF、bFGF的DMEM/F12的培養(yǎng)液培養(yǎng)3-4天，用細(xì)胞核電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染GPR50的siRNA，每個電轉(zhuǎn)杯轉(zhuǎn)

4、染siRNA200nM，然后將細(xì)胞按每孔500個細(xì)胞的密度種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)8天，檢測形成的神經(jīng)球數(shù)目，按2x104的密度在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)8天檢測形成神經(jīng)球的大小。用含B27和0.5％的胎牛血清的DMEM/F12分化培養(yǎng)液培養(yǎng)5天，然后分析神經(jīng)前體細(xì)胞分化為星型膠質(zhì)細(xì)胞的情況。在分子機制方面，通過實時定量PCR（q-PCR）和熒光素酶報告基因的方法，在轉(zhuǎn)錄水平上檢測與神經(jīng)前體細(xì)胞增殖和分化相關(guān)的一些基因的表達。
　　結(jié)

5、果：
　　1）GPR50在VZ區(qū)和離體培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞上表達。
　　2）用siRNA干擾GPR50后，神經(jīng)前體細(xì)胞的自我更新能力減弱。
　　3）用siRNA干擾GPR50后，對星型膠質(zhì)細(xì)胞的分化沒有影響。
　　4）用siRNA干擾GPR50后，Hes1的表達水平升高，而TCF7L2，Ngn1，Ngn2和cyclin D1的表達水平降低。
　　結(jié)論：GPR50在VZ區(qū)和離體培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞上表達。GPR5