Notch3通過β-catenin通路促進肝癌細胞自我更新機制的研究.pdf

1、[目的]
　　1.檢測Notch3在肝癌中的表達情況，初步探討Notch3對肝癌細胞的分化、化療敏感性、生存能力的影響。
　　2.明確Notch3與β-catenin信號通路之間的相互作用，闡明Notch3通過β-catenin信號通路參與肝癌細胞干性特征維持的機制。
　　3.為研究肝癌細胞自我更新機制提供理論依據(jù)。
　　[方法]
　　1.收集臨床肝癌病人的癌和癌旁組織樣本以及相應的病例資料。
　　2

2、.Q-RT-PCR檢測臨床樣本中Notch通路相關基因(Notch1-4，jagged2，Hes1)表達。
　　3.Western-blot、免疫組化檢測肝癌樣本中Notch3、β-catenin以及干性相關基因蛋白的表達。
　　4.培養(yǎng)并篩選出高表達Notch3的肝癌細胞系，通過siRNA轉染肝癌細胞系沉默Notch3的mRNA表達。
　　5.運用流式細胞分析、FACS方法篩選出陽性表達Notch3的肝癌細胞。

3、>　　6.ALDH分析法檢測篩選出的Notch3陽性細胞和Notch3敲低的肝癌細胞的干性。
　　7.MTT法、克隆形成法研究Notch3沉默對肝癌細胞的化療敏感性、生存能力的影響。
　　[結果]
　　1.Notch3、Hes1基因在肝癌組織樣本中明顯高表達，其中Notch3表達率為71.8％，Hes1表達率為78.1％，且Notch3與Hes1之間存在正相關性。
　　2.Notch3與腫瘤分化程度負相關，與AF

4、P濃度呈正相關，而AFP濃度與腫瘤分化程度呈負相關，Notch3高表達則預后較差。
　　3.肝癌組織樣本中Notch3與β-catenin表達相反。腫瘤干性基因Myc、Oct4在肝癌組織樣本中無表達，而Nanog表達明顯增加且與Nocth3表達特征相符。
　　4.Notch3在肝癌細胞系QGY7701和HepG2中明顯高表達;沉默Notch3mRNA后的QGY7701和HepG2細胞中β-catenin表達上調而Nanog表

5、達下調。
　　5.Notch3陽性細胞中Nanog蛋白明顯增加，而敲出Notch3后Nanog陽性細胞數(shù)量減少;Notch3陽性細胞培養(yǎng)7天后Notch3表達逐漸降低;ALDH在QGY7701中活性較高，而敲出Notch3后活性則減弱。
　　6.敲出Notch3后的QGY7701和HepG2細胞對順鉑有較高的敏感性且克隆形成能力減弱。
　　[結論]
　　1.Notch3參與肝癌的發(fā)生發(fā)展;Notch3高表達導致H

6、es1基因表達上調;Notch3可作為判斷肝癌的潛在標志物。
　　2.Notch3能夠反映肝癌分化程度和肝癌預后。
　　3.Notch3負調控β-catenin信號通路;Notch3可能通過抑制β-catenin和上調Nanog的表達，來調節(jié)腫瘤細胞的分化及肝癌細胞干性特征的維持。
　　4.Notch3與肝癌細胞的化療敏感性及其生存相關。
　　5.Notch3與β-catenin相互作用為研究肝癌細胞自我更新機制