EPO促進(jìn)胚胎期氟他胺誘導(dǎo)的隱睪生殖發(fā)育及Leydig細(xì)胞增殖分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討促紅細(xì)胞生成素（EPO）對胚胎期氟他胺（Flu）誘導(dǎo)隱睪生殖細(xì)胞發(fā)育的生物效應(yīng)及其作用機(jī)制；探討外源性EPO對睪丸原代Leydig細(xì)胞增殖分化及內(nèi)分泌功能的影響。
　　方法：
　　1.氟他胺誘導(dǎo)后的SD仔鼠出生后隨機(jī)分為三組：Flu組（n=36）、Flu+EPO組（n=42）和Flu+PBS組（n=32），正常飼養(yǎng)的SD仔鼠分為正常對照組（n=40）及EPO組（n=16）；Flu組和正常對照組常規(guī)飼養(yǎng)，

2、Flu+EPO組、EPO組及Flu+PBS組于PD1~7 d隔天腹腔注射1000 U/kg外源性EPO或同等體積的PBS。PD25時(shí)統(tǒng)計(jì)隱睪發(fā)生率及睪丸臟器系數(shù)，觀察睪丸組織學(xué)變化，統(tǒng)計(jì)生殖指數(shù)，測量曲細(xì)精管橫截面積和直徑，免疫組織化學(xué)法及Western blot檢測睪丸間隙連接蛋白Connexin43在睪丸組織中的表達(dá)。Western blot及免疫組化檢測睪丸組織piwil2、piwil4蛋白質(zhì)表達(dá)，Western blot檢測睪丸

3、組織內(nèi)EPO、EPOR表達(dá)水平，ELISA檢測睪丸組織內(nèi)睪酮的含量。
　　2.差速貼壁法分離1W齡、3W齡及7W齡雄性SD大鼠睪丸leydig細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中加入2U/ml外源性EPO進(jìn)行干預(yù)， MTT檢測各組細(xì)胞增殖指數(shù)，3β-HSD染色檢測leydig細(xì)胞分化能力，HPLC檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中睪酮含量。
　　結(jié)果：
　　1.Flu+EPO組隱睪發(fā)生率為38.1％(16/42)，較Flu組55.6%(20/3

4、6)及Flu+PBS組53.1%(17/32)降低；Flu隱睪組睪酮含量明顯低于正常對照組（P＜0.05），而Flu+EPO隱睪組的睪酮含量與正常對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；EPO組、Flu非隱睪組、Flu隱睪組、Flu+EPO非隱睪組及Flu+EPO隱睪組的睪丸組織EPO/EPOR比值均明顯高于正常對照組（P＜0.05）。Flu+EPO隱睪組生精上皮細(xì)胞數(shù)量、睪丸臟器系數(shù)、生殖指數(shù)、平均曲細(xì)精管面積及直徑均明顯大于Flu組

5、（P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01）且與正常對照組無明顯差異。EPO能夠促進(jìn)Connexin43蛋白在隱睪組織中的正常表達(dá)。Flu隱睪組睪丸組織piwil2、piwil4蛋白分布異常，F(xiàn)lu+EPO隱睪組睪丸組織piwil2、piwil4蛋白表達(dá)與正常對照組比較無明顯差異。
　　2.除了7W齡組培養(yǎng)72h時(shí)，其他所有觀察點(diǎn)的EPO組原代培養(yǎng)睪丸leydig細(xì)胞的數(shù)量均要多于無EPO組（P＜0.05）。三個(gè)年齡

6、組中，同一時(shí)間點(diǎn)無EPO組與EPO組間比較，3β-HSD染色細(xì)胞陽性率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。3W齡組及7W齡組，24h、48h、72h時(shí)EPO組培養(yǎng)液睪酮含量均明顯高于無EPO組（P＜0.001）。
　　結(jié)論：
　　1.外源性EPO可以降低胚胎期Flu暴露后隱睪發(fā)生率，促進(jìn)隱睪生殖細(xì)胞發(fā)育，維持隱睪睪丸組織Connexin43正常表達(dá)；EPO可通過改善隱睪睪丸內(nèi)睪酮水平，促進(jìn)血睪屏障正常形成，使piwil2、piw