EphA3基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞模型的建立.pdf

1、EphA3是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的基因，目前關(guān)于它的文獻(xiàn)報(bào)道得較少。我們實(shí)驗(yàn)室在研究前列腺癌相關(guān)基因PC-1的時(shí)候發(fā)現(xiàn)EphA3的表達(dá)與PC-1基因的表達(dá)有相關(guān)性，這種相關(guān)性提示我們，EphA3可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。 因此，為了驗(yàn)證我們的推測(cè)，按照常規(guī)的研究思路，構(gòu)建了pcDNA3.1(-)/myc-his-EphA3的真核表達(dá)載體，通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染將其導(dǎo)入成纖維細(xì)胞NIH3T3中建立穩(wěn)定的NIH3T3-EphA3、NIH3T

2、3-null的細(xì)胞克隆，然后通過(guò)MTT、平板克隆實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)初步證明EphA3的高表達(dá)可以顯著提高前列腺癌的克隆形成能力和錨著非依賴生長(zhǎng)能力，即可促進(jìn)前列腺癌的惡性轉(zhuǎn)化。 而且，為了證明EphA3基因是否能象PC-1一樣極顯著的促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，即證明EphA3基因是否為真正的前列腺癌正相關(guān)基因，構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1-EphA3-IRES-PC-1，并通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞獲得了高表達(dá)Eph

3、A3、PC-1的LNCaP-EphA3、LNCaP-PC-1的穩(wěn)定細(xì)胞克隆，以及同時(shí)穩(wěn)定表達(dá)EphA3和PC-1的LNCaP-EphA3-PC-1細(xì)胞克隆。 穩(wěn)定的細(xì)胞克隆通過(guò)平板克隆實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，初步證明EphA3、PC-1的高表達(dá)均可以顯著提高前列腺癌的克隆形成能力和錨著非依賴生長(zhǎng)能力，以及導(dǎo)致裸鼠體內(nèi)成瘤。即EphA3具有與PC-1相似的功能。 另外，構(gòu)建了九個(gè)用于進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用實(shí)驗(yàn)的