6種重金屬化合物對(duì)人Bel-7402肝癌細(xì)胞毒性及EGFP基因DNA甲基化的影響.pdf

1、目的：以體外培養(yǎng)人Bel-7402肝癌細(xì)胞為模型，研究氯化鉛（PbCl2）、乙酸鉛（ Pb(CH3COO)2）、硝酸鉛（ Pb(NO3)2）、氯化銅（ CuCl2）、乙酸銅（Cu(CH3COO)2）、硝酸銅（Cu(NO3)2）等幾種常見(jiàn)重金屬化合物的細(xì)胞毒性和去甲基化表觀(guān)遺傳毒性。
　　方法：應(yīng)用MTS方法檢測(cè)細(xì)胞的存活率，以前期研究建立的化學(xué)物去甲基化表觀(guān)遺傳毒性評(píng)價(jià)新方法評(píng)價(jià)化合物的去甲基化表觀(guān)遺傳毒性（使用DNA甲基化酶對(duì)

2、pEGFP-C3質(zhì)粒綠色熒光蛋白基因的啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行甲基化修飾，隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)人類(lèi)Bel-7402肝癌細(xì)胞株，以所研究的化合物對(duì)上述轉(zhuǎn)染后的Bel-7402細(xì)胞進(jìn)行染毒處理，最后根據(jù)細(xì)胞綠色熒光強(qiáng)度和熒光陽(yáng)性細(xì)胞比例來(lái)定性定量評(píng)價(jià)研究物質(zhì)的去甲基化表觀(guān)遺傳毒性強(qiáng)弱，簡(jiǎn)稱(chēng) QDMP方法）。
　　結(jié)果：所研究的6種化合物通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)顯示均會(huì)抑制Bel-7402細(xì)胞的增殖。通過(guò)對(duì)同種重金屬三種不同化合物類(lèi)型的不同染毒濃度的細(xì)胞存活率

3、進(jìn)行配對(duì)設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)后顯示，除了硝酸鉛和乙酸鉛對(duì)Bel-7402細(xì)胞存活率的影響有顯著性差異外，其余各同種重金屬不同化合物間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其對(duì)Bel-7402細(xì)胞抑制能力為銅高于鉛。去甲基化表觀(guān)遺傳毒性檢測(cè)結(jié)果顯示， PbCl2、Pb(CH3COO)2、Pb(NO3)2、CuCl2、Cu(CH3COO)2、Cu(NO3)2均可觀(guān)察到明顯的去甲基化表觀(guān)遺傳毒性，其相對(duì)于5-氮-2-脫氧胞苷（5-

4、Aza-CdR）的去甲基化表觀(guān)遺傳毒性當(dāng)量分別為2.82E-03、1.50E-03、5.09E-04、3.31E-05、6.87E-05、3.45E-05。通過(guò)對(duì)同種重金屬三種不同化合物類(lèi)型的不同染毒濃度的去甲基化表觀(guān)遺傳毒性單量值進(jìn)行配對(duì)設(shè)計(jì) t檢驗(yàn)后顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其去甲基化能力大小為鉛高于銅。
　　結(jié)論：鉛和銅化合物均會(huì)使Bel-7402細(xì)胞的細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞的質(zhì)粒上增強(qiáng)型