大鼠kir6.2基因真核表達載體的構建及其在hek293細胞中的表達

1、山東大學碩士學位論文大鼠Kir6.2基因真核表達載體的構建及其在HEK293細胞中的表達姓名：任曉燕申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：杜怡峰；馬國詔20110512山東大學碩士學位論文H E l Q 9 3 細胞中的過表達。研究結果 1 ．R T ．P C R 產物經0 ．8 ％瓊脂糖凝膠電泳后得到一條約1 ．2 K b 的特異條帶。2 ．p E A S Y - T 1 ／K i r 6 ．2 測序結果與G e n eB a n

2、 k 臀錄序列( A B 0 4 3 6 3 8 ) 進行B l a s t 序列比對，堿基序列完全一致。證明本實驗已正確克隆了鼬r 6 ．2 基因的c D N A 序列。3 ．經P C R 和D N A 序列測定證實，目的基因瞄r 6 ．2 已成功插入重組質粒p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 。4 ．將具有G 4 1 8 抗性的轉染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細胞

3、克隆抽提總R N A ，進行R T ．P C R 反應，得到一約1 ．2 k b 的目的條帶，而對照組細胞克隆經R T ．P C R 后無特異性條帶生成；具有G 4 1 8 抗性的轉染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細胞克隆經W e s t e r nB l o t 證實在4 0 k D 處有高表達的K i r 6 ．2 蛋白條帶，對照組僅有極低水平的內源性k i r 6 ．2 蛋白表達。

4、均表明轉染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細胞克隆中存在K i r 6 ．2 基因。研究結論本研究成功構建了鼬r 6 ．2 基因的真核表達載體p c D N A 3 ．0 ／k i r 6 ．2 ，并獲得了穩(wěn)定表達鼬r 6 ．2 基因的H E K 2 9 3 細胞克隆。研究意義高表達K i r 6 ．2 基因的細胞克隆的成功構建為進一步研究K i r 6 ．2 基因的生物學功能以及K i