大鼠kir6.2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在hek293細(xì)胞中的表達(dá)

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠Kir6.2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)姓名：任曉燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：杜怡峰；馬國詔20110512山東大學(xué)碩士學(xué)位論文H E l Q 9 3 細(xì)胞中的過表達(dá)。研究結(jié)果 1 ．R T ．P C R 產(chǎn)物經(jīng)0 ．8 ％瓊脂糖凝膠電泳后得到一條約1 ．2 K b 的特異條帶。2 ．p E A S Y - T 1 ／K i r 6 ．2 測(cè)序結(jié)果與G e n eB a n

2、 k 臀錄序列( A B 0 4 3 6 3 8 ) 進(jìn)行B l a s t 序列比對(duì)，堿基序列完全一致。證明本實(shí)驗(yàn)已正確克隆了鼬r 6 ．2 基因的c D N A 序列。3 ．經(jīng)P C R 和D N A 序列測(cè)定證實(shí)，目的基因瞄r 6 ．2 已成功插入重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 。4 ．將具有G 4 1 8 抗性的轉(zhuǎn)染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細(xì)胞

3、克隆抽提總R N A ，進(jìn)行R T ．P C R 反應(yīng)，得到一約1 ．2 k b 的目的條帶，而對(duì)照組細(xì)胞克隆經(jīng)R T ．P C R 后無特異性條帶生成；具有G 4 1 8 抗性的轉(zhuǎn)染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細(xì)胞克隆經(jīng)W e s t e r nB l o t 證實(shí)在4 0 k D 處有高表達(dá)的K i r 6 ．2 蛋白條帶，對(duì)照組僅有極低水平的內(nèi)源性k i r 6 ．2 蛋白表達(dá)。

4、均表明轉(zhuǎn)染p c D N A 3 ．0 ／K i r 6 ．2 的H E K 2 9 3 細(xì)胞克隆中存在K i r 6 ．2 基因。研究結(jié)論本研究成功構(gòu)建了鼬r 6 ．2 基因的真核表達(dá)載體p c D N A 3 ．0 ／k i r 6 ．2 ，并獲得了穩(wěn)定表達(dá)鼬r 6 ．2 基因的H E K 2 9 3 細(xì)胞克隆。研究意義高表達(dá)K i r 6 ．2 基因的細(xì)胞克隆的成功構(gòu)建為進(jìn)一步研究K i r 6 ．2 基因的生物學(xué)功能以及K i