黃丹蘭顆粒劑毒性、抗癌作用及制劑質量控制研究.pdf

1、目的：通過黃丹蘭顆粒劑對小鼠的急性毒性和大鼠的長期毒性試驗研究，考察對試驗動物有無毒性；建立小鼠Hca-F肝癌模型，觀察黃丹蘭顆粒劑對Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用；采用高效液相色譜法測定黃丹蘭顆粒劑中苦參堿和氧化苦參堿含量，以建立黃丹蘭顆粒劑的質量控制方法。
　　方法：
　　1.小鼠急性毒性試驗即將黃丹蘭顆粒劑配成混懸液，以每毫升相當于0.4g顆粒劑的劑量通過灌注的方式送到小鼠胃中，持續(xù)一個星期的觀察，同時記錄小鼠體重的

2、波動情況，評價試驗小鼠的精神、食欲、膚色、分泌物、眼、呼吸、肌肉運動等方面變化。
　　2.大鼠長期毒性試驗是將黃丹蘭顆粒劑溶于水中，配置成三種不同濃度：0.4 g/(kg·d)、1.04 g/(kg·d)、2.83 g/(kg·d)的混懸液，并依次標明為低劑量、中劑量以及高劑量，并通過灌注的方式將其送到大鼠胃內，按照1次/天的標準持續(xù)灌注一個月，在此期間檢查和統(tǒng)計大鼠的血液學指標，比如凝血時間、紅細胞數(shù)量、白細胞數(shù)量、血小板數(shù)量、

3、血紅蛋白含量、白細胞分類等，除此之外還要觀察和統(tǒng)計尿常規(guī)、血液生化指標、各臟器、睪丸或子宮的情況，采用病理學方法對這些組織進行檢測。
　　3.該藥物對實驗性肝癌Hca-F荷瘤小鼠模型的影響通過小鼠肝癌Hca-F小鼠細胞株注射造模，觀察黃丹蘭顆粒劑對肝癌 Hca-F荷瘤小鼠抑瘤率、對荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響以及 Hca-F荷瘤小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗作為觀察指標，探討黃丹蘭顆粒劑對 Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用及機制；通過

4、對荷瘤小鼠血清中IL-2和VEGF表達水平的測定考察黃丹蘭顆粒劑對荷瘤小鼠免疫功能的影響以及黃丹蘭顆粒劑抗癌作用的有效性。
　　4.采用TIANHE? Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，流動相為磷酸鹽緩沖液（pH=3.0）-甲醇（93:7），流速為0.8 ml·min-1，柱溫為35℃，檢測波長為220 nm的HPLC法測定黃丹蘭顆粒劑中苦參堿和氧化苦參堿含量。
　　結果：
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5、.小鼠急性毒性試驗結果表明，實施藥物治療后，小鼠的普通行為、反射行為、對食物和水的需求、大小便等都沒有出現(xiàn)任何異常。
　　2.大鼠長期毒性試驗結果表明，服用不同劑量的黃丹蘭顆粒劑后，大鼠體重上升幅度以及行為均保持正常，并且各項針對血液、尿液、器官組織的檢查結果也表明基本和對照組一致。組織病理學檢查結果表明，接受藥物治療的大鼠的臟器都沒有出現(xiàn)毒性病理改變。
　　3.黃丹蘭顆粒劑對小鼠Hca-F肝癌模型的影響的試驗結果顯示，黃丹

6、蘭顆粒劑能抑制肝癌Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的生長，以高劑量更明顯；并且黃丹蘭顆粒劑在一定程度上能夠提高荷瘤小鼠的免疫功能。
　　4.苦參堿進樣濃度在2.5μg/ml~25.0μg/ml范圍內呈良好線性關系，平均加樣回收率為99.99％，RSD=0.0577%(n=6)；氧化苦參堿進樣濃度在2.0μg/ml~20.0μg/ml范圍內呈線性關系，加樣回收率的平均值為99.78%，RSD=0.4432%(n=6)。
　　結論：