基于嘌呤堿基電化學信號的抗癌藥物篩選方法的研究.pdf

1、目的：研究人乳腺癌（MCF-7）細胞在黃嘌呤氧化酶（XO）作用前后的電化學行為，建立酶催化電化學檢測系統(tǒng)，然后利用該體系完成環(huán)磷酰胺作用下細胞中嘌呤堿基代謝變化的測試，為酶催化電化學檢測系統(tǒng)應(yīng)用于抗癌藥物篩選實驗奠定基礎(chǔ)。
　　方法：以MCF-7細胞作為細胞模型，以離子液體與多壁碳納米管復合修飾電極（MWNTs-IL/GCE）作為工作電極，采用線性掃描伏安法(LSV)研究了嘌呤標準品和MCF-7細胞在XO作用前后的電化學行為，建立

2、了四種嘌呤濃度與信號強度之間的線性回歸曲線，采用高效液相色譜法對MCF-7細胞的電化學信號歸屬進行了驗證，基于此建立酶催化電化學檢測系統(tǒng)；采用酶催化電化學方法和常規(guī) MTT法對照研究藥物對MCF-7細胞活性的影響，來驗證酶催化電化學方法的準確性與可行性。
　　結(jié)果：原位裂解后的MCF-7細胞在MWNTs-IL/GCE電極上產(chǎn)生兩個敏感的電化學信號，分別歸屬為黃嘌呤（X）和鳥嘌呤（G）的氧化（0.623 V），以及次黃嘌呤（HX）和

3、腺嘌呤（A）的氧化（0.953 V）；檢測最佳條件：pH值7.4，50℃恒溫水浴裂解30 min；然后在XO的作用下，X和HX將完全被催化成尿酸（UA）和過氧化氫（H2O2），剩余信號分別為G和A，基于原信號與剩余信號可以計算出X和HX的信號強度，進而根據(jù)四種嘌呤濃度與信號強度之間的線性回歸曲線可以計算出每種嘌呤的濃度，從而建立了酶催化電化學檢測體系；然后利用該體系完成了抗癌藥物篩選實驗。在進行給藥實驗時，通過對給藥組和對照組的對比，明

4、顯的發(fā)現(xiàn)給藥組的電化學信號減弱，同時通過與MTT實驗結(jié)果的對比，證實了電化學方法的準確性。
　　結(jié)論：采用電化學法檢測到MCF-7細胞有兩個明顯信號峰，以這兩個信號峰為指標，通過引入黃嘌呤氧化酶建立了酶催化電化學檢測系統(tǒng)，通過這個酶催化電化學檢測方法，能夠同時獲得MCF-7細胞中四種嘌呤堿基濃度。采用酶催化電化學方法研究藥物對MCF-7細胞活性影響的結(jié)果與常規(guī)MTT法所得到結(jié)果一致，說明酶催化電化學方法可以應(yīng)用到與嘌呤代謝相關(guān)的生