Genistein延緩大鼠椎間盤退變的初步研究.pdf

1、目的：建立一種簡單有效，可重復(fù)性強(qiáng)的椎間盤退變動物模型，并應(yīng)用受體酪氨酸酶抑制劑（Genistein）對該椎間盤退變動物模型進(jìn)行干預(yù)研究，以此研究 Genistein在治療椎間盤退行性疾病中存在的治療價值。
　　方法：
　　第一部分：三月齡清潔級雄性SD大鼠24只，以數(shù)字表法隨機(jī)分成4組：空白組和3個實(shí)驗(yàn)組，每組6只。定位Co7/8、Co8/9及Co9/10椎間隙，分別用16G、18G及26G注射針頭分別穿刺，以纖維環(huán)穿刺法

2、建立椎間盤退變模型，實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后1周、2周和4周隨機(jī)選取6只大鼠，行磁共振T2像矢狀位掃描，根據(jù)椎間盤信號計算Thompson評分。檢查完畢后處死大鼠，取Co7/8、Co8/9及Co9/10椎間盤行HE染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色，根據(jù)HE染色計算組織學(xué)評分，并觀察髓核組織Ⅱ型膠原蛋白陽性表達(dá)趨勢。
　　第二部分：三月齡清潔級雄性SD大鼠30只，以數(shù)字表法隨機(jī)分成5組：正常組、空白組和3個實(shí)驗(yàn)組，每組6只?？瞻捉M為造模組，且不予

3、Genistein注射；實(shí)驗(yàn)組造模后按Genistein的注射劑量（5mg/ml、10mg/ml和20mg/ml）分3組。MRI掃描、HE染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色同第一部分。
　　結(jié)果：
　　第一部分：Co7/8椎間盤信號在穿刺后一周開始下降，而Co8/9、Co9/10信號仍呈現(xiàn)為高信號，兩周后Co7/8椎間盤信號進(jìn)一步降低，呈現(xiàn)出“Dark disc”，且椎間隙變小，Co8/9椎間盤信號開始降低，呈退變表現(xiàn)，觀察期間Co

4、9/10始終呈高信號，Co7/8在穿刺一周后的Thompson評分與正常椎間盤相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；在穿刺2周后，18G穿刺組的Thompson評分降低出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，Co9/10椎間盤在穿刺4周后，信號略微下降，但與正常組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；穿刺一周后，Co7/8椎間盤髓核體積縮小，甚至消失，纖維環(huán)結(jié)構(gòu)紊亂，有的呈破損狀，且纖維環(huán)與髓核分界不清，髓核體積隨穿刺時間逐漸縮小，在穿刺四周時，髓核組織被纖

5、維組織代替，呈纖維化表現(xiàn)，Co8/9椎間盤在穿刺兩周時，髓核開始縮小，纖維環(huán)扭曲，呈退變表現(xiàn)；四周時，髓核細(xì)胞進(jìn)一步減少，纖維環(huán)結(jié)構(gòu)紊亂，Co9/10椎間盤造模觀察期間，僅在四周時出現(xiàn)髓核細(xì)胞少量減少，纖維環(huán)輕度破壞，根據(jù)組織學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)，Co7/8椎間盤在造模一周后的組織學(xué)評分與正常椎間盤相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且評分隨時間逐漸升高；Co8/9椎間盤的評分在造模兩周時出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異；Co9/10椎間盤的組織學(xué)評分無統(tǒng)計

6、學(xué)差異（P＞0.05）；Co7/8椎間盤在穿刺后一周時Ⅱ型膠原染色顏色變淺，且隨時間增加，陽性染色逐漸減少，Co8/9椎間盤中Ⅱ型膠原蛋白陽性染色在兩周時開始變淡，且陽性染色區(qū)域變小，Co9/10椎間盤的Ⅱ型膠原免疫組化與正常椎間盤相比，無明顯差異，可見在髓核組織中呈廣泛的黃色或黃棕色染色。
　　第二部分：造模后一周干預(yù)組與空白組相比，椎間盤信號有不同程度改善，藥物干預(yù)后的椎間盤信號強(qiáng)度隨藥物劑量的增加而增加，但隨著時間的增加，椎

7、間盤信號逐漸降低，藥物干預(yù)一周時，5mg/ml劑量注射組椎間盤Thompsom評分與空白組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），10mg/ml劑量注射組及20mg/ml劑量注射組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），在藥物干預(yù)四周時，20mg/ml劑量注射組與空白組相比，差異仍具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；5mg/ml劑量注射組的組織學(xué)評分與空白組相比，在各時間點(diǎn)均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），10mg/ml劑量注射組及20mg/m

8、l劑量注射組的組織學(xué)評分在干預(yù)一周時均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但在藥物干預(yù)四周時，10mg/ml劑量注射組無統(tǒng)計學(xué)差異，20mg/ml劑量注射組與空白組相比，差異仍具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；5mg/ml劑量注射組干預(yù)一周后，髓核中Ⅱ型膠原蛋白染色呈淡黃色，隨著時間增加，顏色逐漸變淡，在干預(yù)四周時，髓核中基本無陽性染色可見；10mg/ml劑量注射組及20mg/ml劑量注射組在干預(yù)一周后，髓核組織中陽性染色區(qū)域較多，且呈黃色或

9、棕黃色，在干預(yù)兩周時，10mg/ml劑量注射組的陽性染色開始變淡，20mg/ml劑量注射組僅在干預(yù)四周時出現(xiàn)陽性染色區(qū)稍變小。
　　結(jié)論：
　　1.針刺纖維環(huán)法是一種方便可行的椎間盤退變模型的造模方法，且18G針頭最適合于造模，26G針頭適用于椎間注射藥物。
　　2.Genistein能延緩大鼠椎間盤退變，但不能阻止退變的發(fā)生。
　　3.Genistein的療效與藥物濃度相關(guān)，藥物濃度越大，療效越明顯。