MMP-28與椎間盤退變關系的研究.pdf

1、目的：椎間盤退變的原因很多，基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinasesMMPs)表達量增加被認為是導致椎間盤退交的主要機制之一。有關MMPs與椎間盤退變之間的關系一直是研究熱點，然而MMPs家族的最新成員MMP-28與椎間盤退變的關系國內外卻鮮有報道。本實驗通過檢測MMP-28在正常與不同退變等級的椎間盤中的表達，研究MMP-28與椎間盤退變的關系。研究表明細胞因子如IL-1β、TNF-α參與椎間盤退變，且可以調

2、控MMPs表達，本實驗將體外培養(yǎng)的人體髓核細胞與IL-1β、TNF-α共培養(yǎng)，檢測MMP-28mRNA轉錄水平，探討IL-1β、TNF-α對髓核細胞的MMP-28是否具有調控作用。
　　方法：收集2012年4月-2012年12月期間在徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院手術的腰椎間盤突出癥患者的髓核標本30例為退變組，同期手術的胸腰段骨折患者的髓核標本10例為對照組，將標本根據(jù)Pfirrman分級分為五級，按突出程度分為突出型和脫出型，應用免疫組織

3、化學染色法檢測髓核標本中MMP-28的表達，記錄染色陽性率并進行分級，采用等級秩和檢驗、Mann-Whitney U法進行統(tǒng)計學分析，同時采用Spearman等級相關分析法分析椎間盤退變等級與MMP-28表達強度的相關性。應用RT-PCR法檢測髓核組織MMP28mRNA的轉錄水平，并采用獨立樣本t檢驗分析比較退變組和對照組、突出組和脫出組中轉錄水平的差異。培養(yǎng)人體正常髓核細胞，將三個不同濃度的IL-1β(0ng/ml、10ng/ml、5

4、0ng/ml)和三個不同濃度的TNF-α(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)分別與體外擴增的第三代髓核細胞聯(lián)合培養(yǎng)72h，RT-PCR法測定MMP-28mRNA的轉錄水平，采用單因素方差分析法比較轉錄水平的差異。
　　結果：30例退變髓核組織中有26例檢測到MMP-28表達，陽性率等級分布為（-）4例、(+)5例、(++)7例、（+++）8例、（++++）6例，10例對照組中僅有2例檢測到MMP-28表達，陽性率等級

5、分布為（-）8例、(+)1例、(++)1例，MMP-28在對照組和實驗組中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。椎間盤退變等級分布為:Ⅱ級6例、Ⅲ級9例、Ⅳ級8例、Ⅴ級7例，MMP-28表達與椎間盤退變等級呈中度正相關(rs=0.670，P＜0.01)。15例突出髓核組織中有12例檢測到MMP-28表達，陽性率等級分布為（-）3例、(+)4例、(++)4例、（+++）3例、(++++)1例，15例脫出髓核組織中有14例檢測到MMP-2

6、8表達，陽性率等級分布為（-）1例、(+)1例、(++)3例、（+++）5例、（++++）5例，MMP-28在突出組和脫出組中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。退變組mRNA轉錄水平(0.627±0.125)較對照組(0.401±0.065)顯著升高，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，同時發(fā)現(xiàn)脫出組MMP-28mRNA轉錄水平(0.698±0.988)較突出組(0.556±0.108)顯著升高，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0

7、.01)。
　　不同濃度(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml)的IL-1β與髓核細胞共培養(yǎng)72小時后，各組間MMP-28mRNA轉錄水平(0.325±0.019、0.343±0.018、0.343±0.018)無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。不同濃度(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml) TNF-α與髓核細胞共培養(yǎng)72小時后，各組間MMP-28mRNA轉錄水平(0.325±0.019、0.515±0.02、0.