血管緊張素轉換酶2(ACE2)在奶牛乳腺中的表達分布及其抗損傷作用.pdf

1、本研究旨在研究在ACE2在奶牛乳腺組織中的表達分布及其抗損傷作用。研究主要包括以下兩方面的內容:
　　1 ACE2/ACE在奶牛乳腺中的表達及細胞定位
　　本研究通過RT-PCR、Western-Blot及免疫熒光檢測技術確定RAS系統(tǒng)在奶牛乳腺組織中的表達及細胞定位。試驗分別選用健康泌乳期荷斯坦奶牛乳腺活體取樣的組織樣品和牛乳腺上皮細胞（Mac-T細胞），進行如下試驗:1）RT-PCR法確定ACE和ACE2在奶牛乳腺組織中

2、的mRNA表達;2）ACE2基因克隆、擴增并鑒定;2）Western Blot法確定ACE和ACE2蛋白在乳腺組織中的表達;4）免疫熒光法確定ACE/ACE2蛋白在牛乳腺上皮細胞中的細胞定位。結果:1）RT-PCR結果顯示:奶牛乳腺組織中ACE和ACE2基因均有表達;2)ACE2目的基因的PCR產物經克隆鑒定、測序大小為202bp，與預期一致;3）Western Blot結果得到了ACE/ACE2特異性條帶，證實奶牛乳腺組織中有兩種蛋白

3、的表達;4）細胞免疫熒光結果顯示:ACE和ACE2蛋白在牛乳腺上皮細胞中有分布。本研究首次證實牛乳腺中有ACE2和ACE的存在，為進一步研究ACE2在乳腺組織中的抗損傷作用提供了依據。
　　2 ACE2在長期飼喂高精料日糧奶牛乳腺中的抗損傷作用
　　6頭健康泌乳期荷斯坦奶牛，隨機分為正常對照組（精粗比4:6）和高精料組(精粗比6:4);采用單欄定時定量飼喂，并擠奶，收集乳樣。飼喂第20周，活體取乳腺組織，進行如下試驗:1）常

4、規(guī)法測定乳中體細胞數、LPS含量及乳中和乳腺組織中NAGase、MPO和AKP的酶活力;2）乳腺組織的形態(tài)學檢測;3）Real-time PCR法分析乳腺組織中ACE、AT1、ACE2、Mas的mRNA表達水平;4）ELISA法檢測AngⅡ、Ang1-7含量。結果:1）高精料組奶牛乳中體細胞數、LPS含量、NAGase和AKP活力均顯著高于正常對照組(P＜0.05)，MPO活力兩組之間無顯著差異;2）HE染色結果顯示高精料組奶牛乳腺組織

5、有炎性損傷變化;3）與正常對照組相比，高精料組奶牛乳腺組織中ACE、AT1、ACE2、Mas mRNA表達量均顯著升高(P＜0.05)，ACE2/ACE比值高于正常對照組;4）與正常對照組相比，高精料組奶牛乳腺組織中Ang1-7含量顯著升高(P＜0.05);AngⅡ的含量則顯著降低(P＜0.05)結論:長期飼喂高精料日糧對奶牛乳腺造成一定程度的損傷，乳腺中RAS處于激活狀態(tài)，以ACE2-Ang1-7-Mas軸的活力處于優(yōu)勢狀態(tài)，即ACE