縫隙連接蛋白Cx45、Cx40及TNF-a在梗死心肌中表達及作用.pdf

1、目的：
　　在法醫(yī)檢案中猝死日益增多,對猝死的研究已經(jīng)有了足夠重視。心源性猝死（Sudden Cardiac Death,SCD）在成人的猝死原因中占首位。急性心肌梗死(AcuteMyocardial Infaction,AMI)發(fā)生惡性的、致命性的心律失常是心源性猝死的主要原因之一。急性心肌梗死(AMI)是冠狀動脈急性、持續(xù)性缺血缺氧所引起的心肌壞死。在法醫(yī)鑒定中,有部分心源性猝死者雖然通過系統(tǒng)尸檢及組織形態(tài)學(xué)檢驗仍無法明確具體

2、死因,所以,進一步發(fā)現(xiàn)和研究梗死心肌中的標志物的表達、變化及作用,了解標志物與心肌梗死后惡性、致命性心律失常的關(guān)系,可以為法醫(yī)學(xué)診斷提供非常重要的線索和依據(jù)。
　　心肌組織中縫隙連接蛋白(Connexin,Cx)是一個大家族,包括許多種類,分子量在26～56KD之間,其維持著不同心肌細胞間的“電偶聯(lián)”功能的正常進行,參與心肌細胞間電興奮的形成、化學(xué)信號的傳遞,維持器官功能正常運行。本實驗將通過免疫組化法及qRT-PCR檢測縫隙連接

3、蛋白45（Connexin45,Cx45）、縫隙連接蛋白40（Connexin40,Cx40）及腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF-a)在梗死心肌中的表達情況,探討三者的作用及相關(guān)性,希望可以以此為法醫(yī)學(xué)中心源性猝死死因診斷提供更科學(xué)、準確的診斷手段。
　　方法：
　　1.收集大連醫(yī)科大學(xué)臨床病理研究中心2013-2015年尸檢標本,從中選取由于猝死造成的死亡病例共80例。本實驗共分為三組:a

4、、早期心肌缺血猝死組30例;b、晚期心肌梗死猝死組30例;c、正常心肌組20例。部分實驗的心肌組織樣本通過福爾馬林溶液10％固定,再對各組標本進行石蠟包埋,免疫組化染色;部分組織為尸檢后凍存的心肌標本,-80℃低溫保存,以備提取mRNA用。
　　2.本實驗主要采用免疫組織化學(xué)的方法,通過DAB染色法檢測不同分組心肌組織中Cx45、Cx40以及TNF-a蛋白的表達。
　　3.提取新鮮心肌組織中的mRNA,利用實時定量PCR檢測

5、各組心肌中Cx45、Cx40以及TNF-amRNA的表達情況。
　　4.采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析Cx45、Cx40及TNF-a三者的表達情況及其相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.Cx45在三組心肌中的表達
　　Cx45在三組心肌組織中表達均為陽性表達。正常心肌組、早期心肌缺血猝死組、晚期心肌梗死猝死組中陽性表達率分別為80％、90％、96.7％。兩個猝死組Cx45表達高于正常心肌組,與正常心肌組比較存在顯著差

6、異,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.Cx40在三組心肌中的表達
　　Cx40在三組心肌組織中表達均為陽性。正常心肌組、早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組陽性表達率分別為85％、60％、20％。兩個猝死組中Cx40的表達較正常心肌組明顯減少,差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.TNF-a在三組心肌中的表達
　　TNF-a在早期心肌缺血猝死組及晚期心肌梗死猝死組中呈高表達,陽性表達率分別為6

7、3.3％、83.3％,且晚期心肌梗死猝死組比早期心肌缺血猝死組表達更多,而正常心肌組中表達陽性率僅15.0％,與兩個猝死組比較存在顯著差異(P＜0.05)。
　　4.Cx45、Cx40、TNF-a三者mRNA在三組心肌中的表達
　　qRT-PCR結(jié)果顯示:Cx45蛋白、Cx40蛋白及TNF-a三者的mRNA表達與各自蛋白本身表達相一致,在正常心肌組、早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組中表達存在顯著差異,差異性有統(tǒng)計學(xué)意義

8、(P＜0.01)。
　　5.Cx45、Cx40、TNF-a在三組心肌中相關(guān)性分析
　　經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn):在早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組中,Cx45和TNF-a及兩者mRNA表達增加,呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)R=3.133,P＜0.01。Cx45和Cx40及兩者mRNA表達呈負相關(guān),相關(guān)系數(shù)R=-1.453,P＜0.01。
　　結(jié)論：
　　1、Cx45及其mRNA在早期心肌缺血猝死組及晚期心肌梗死猝死組心肌細胞

9、胞漿中表達水平高于正常心肌組,這將有可能作為心源性猝死診斷的輔助指標。
　　2、Cx40及其mRNA在兩個猝死組心肌組織中表達低于正常心肌組,也可以作為法醫(yī)學(xué)診斷心源性猝死的指標之一。
　　3、TNF-a及其mRNA在早期心肌缺血猝死組和晚期心肌梗死猝死組的表達顯著高于正常心肌組,且晚期心肌梗死猝死組比早期心肌缺血猝死組表達更多,三組中的表達差異,有可能有利于心源性猝死的診斷,且有可能根據(jù)猝死者心肌組織中TNF-a的表達量的